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sunbeartao

新虫 (小有名气)

[求助] 膜蛋白在大肠中表达是否还是膜蛋白？

小虫马上开始做膜蛋白表达了，有些概念不太清楚，不敢下手。
打算在PET中表达膜蛋白（山梨醇脱氢酶），诉诸BL21 ，
表达出来还是在大肠膜上吗？怎么纯化？怎么跑蛋白胶？有步骤或试剂盒吗？请大侠系统的指点下，金币不多，望莫怪！
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22
1楼 2013-07-04 15:32:53
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生物小通

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 有时候要看运气啊 2013-07-06 09:13:43
我做的也是膜蛋白，真核中定位高尔基体和细胞膜，原核中有可溶性表达，至于定位不清楚。纯化也没太大问题。这个东西看自己吧，在我们这里很多老实说不太可能成功的被许多新手就做成功了，相信自己。
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学习，进步
8楼2013-07-04 23:19:07
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普通回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)
传说中的膜蛋白啊，祝好运吧
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-07-04 15:57:18
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sunbeartao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-07-04 15:57:18
传说中的膜蛋白啊，祝好运吧

...兄弟不要这样，搞得好紧张
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22
3楼2013-07-04 20:58:09
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hym0411

木虫 (正式写手)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-04 22:24:26
这的看您插入的膜蛋白的序列是在哪里了？如果是连接到大肠杆菌的膜蛋白序列后，那应该就是了。如果查到其它序列中，那就不知道了。
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生而无涯
4楼2013-07-04 21:35:54
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sunbeartao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hym0411 at 2013-07-04 21:35:54
这的看您插入的膜蛋白的序列是在哪里了？如果是连接到大肠杆菌的膜蛋白序列后，那应该就是了。如果查到其它序列中，那就不知道了。

在质粒中表达
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22
5楼2013-07-04 22:40:13
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panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是形成包涵体，为什么在原核中表达？
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6楼2013-07-04 22:43:00
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sunbeartao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by panda73 at 2013-07-04 22:43:00
应该是形成包涵体，为什么在原核中表达？

啊？为什么形成包涵体？师兄说可以从膜上洗下来的。
之所以选择大肠是野生菌也是原核的，而且之后要做代谢改造，所以大肠比较有优势的
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22
7楼2013-07-04 22:56:46
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sunbeartao

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 生物小通 at 2013-07-04 23:19:07
我做的也是膜蛋白，真核中定位高尔基体和细胞膜，原核中有可溶性表达，至于定位不清楚。纯化也没太大问题。这个东西看自己吧，在我们这里很多老实说不太可能成功的被许多新手就做成功了，相信自己。

嗯，多谢鼓励
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22
9楼2013-07-05 07:10:47
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sunbeartao

新虫 (小有名气)
?
10楼2013-07-06 08:50:37
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