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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 膜蛋白合成，推荐几个比较好的公司
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anlehyyy

木虫 (小有名气)

[求助] 膜蛋白合成，推荐几个比较好的公司

小生最近要做一个关于膜蛋白的实验，膜蛋白需要合成，已知膜蛋白的基因序列，需要公司合成，而且要求蛋白质纯度较高，希望各位推荐几个比较好的蛋白合成公司，万分感谢。希望上帝保佑苦逼的生物孩纸。
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科研穷三代，读博毁一生啊
1楼 2012-06-27 15:41:36
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月月大可

木虫 (著名写手)
看到这个标题我不禁笑了，膜蛋白也能合成？我太out了，求普及
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2楼2012-06-27 15:48:49
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anlehyyy

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-27 15:48:49
看到这个标题我不禁笑了，膜蛋白也能合成？我太out了，求普及

就是用酵母表达出来，然后纯化
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科研穷三代，读博毁一生啊
3楼2012-06-27 18:09:06
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月月大可

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by anlehyyy at 2012-06-27 18:09:06
就是用酵母表达出来，然后纯化...

为毛非要用酵母表达，如果e coli可以搞定那不是更加简单省钱
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4楼2012-06-27 22:23:51
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anlehyyy

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-27 22:23:51
为毛非要用酵母表达，如果e coli可以搞定那不是更加简单省钱...

大哥，那是膜蛋白。要有活性的
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科研穷三代，读博毁一生啊
5楼2012-06-27 22:31:08
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月月大可

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by anlehyyy at 2012-06-27 22:31:08
大哥，那是膜蛋白。要有活性的...

我做蛋白表达多年，没觉得酵母多牛，也没觉的膜蛋白就不能用大肠杆菌表达。
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6楼2012-06-28 15:07:10
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
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6楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-28 15:07:10
我做蛋白表达多年，没觉得酵母多牛，也没觉的膜蛋白就不能用大肠杆菌表达。...

膜蛋白不好纯化的，要是大肠杆菌，蛋白基本都是在细胞碎片上，酵母没做过，不知道。
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7楼2012-06-28 16:38:02
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anlehyyy

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-28 15:07:10
我做蛋白表达多年，没觉得酵母多牛，也没觉的膜蛋白就不能用大肠杆菌表达。...

我也没说酵母牛，是你自己觉得吧。
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科研穷三代，读博毁一生啊
8楼2012-06-28 16:54:01
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月月大可

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-28 16:38:02
膜蛋白不好纯化的，要是大肠杆菌，蛋白基本都是在细胞碎片上，酵母没做过，不知道。...

膜蛋白的纯化难度在于去污剂的应用上。不管是大肠杆菌还是酵母，如果该蛋白表达出来能定外在膜上，都是在细胞碎片中。如果不能，大肠杆菌中就是包涵体。 如果是包涵体纯化起来反而简单，直接洗一洗就比较纯，变复性后再随便用个亲和柱，一般的实验要求就都够了，有些甚至能达到95%以上。
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9楼2012-06-28 18:30:07
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-28 18:30:07
膜蛋白的纯化难度在于去污剂的应用上。不管是大肠杆菌还是酵母，如果该蛋白表达出来能定外在膜上，都是在细胞碎片中。如果不能，大肠杆菌中就是包涵体。 如果是包涵体纯化起来反而简单，直接洗一洗就比较纯，变复性 ...

我觉得，定位的话就胶检就很清楚了。
在膜上的话，基本就是detergent的选择的问题了，说实话，我遇到过，不过惭愧，没做出来。
包涵体纯化其实得到蛋白都是简单的，关键是，如果要求活性的话，就相对麻烦了，其实有的蛋白在形成了包涵体，就可以宣告后面不用做了。
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10楼2012-06-28 20:03:16
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