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anlehyyy

木虫 (小有名气)

[求助] 膜蛋白合成,推荐几个比较好的公司

小生最近要做一个关于膜蛋白的实验,膜蛋白需要合成,已知膜蛋白的基因序列,需要公司合成,而且要求蛋白质纯度较高,希望各位推荐几个比较好的蛋白合成公司,万分感谢。希望上帝保佑苦逼的生物孩纸。
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科研穷三代,读博毁一生啊
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月月大可

木虫 (著名写手)

看到这个标题我不禁笑了,膜蛋白也能合成?我太out了,求普及
2楼2012-06-27 15:48:49
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anlehyyy

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-27 15:48:49
看到这个标题我不禁笑了,膜蛋白也能合成?我太out了,求普及

就是用酵母表达出来,然后纯化
科研穷三代,读博毁一生啊
3楼2012-06-27 18:09:06
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月月大可

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by anlehyyy at 2012-06-27 18:09:06
就是用酵母表达出来,然后纯化...

为毛非要用酵母表达,如果e coli可以搞定那不是更加简单省钱
4楼2012-06-27 22:23:51
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anlehyyy

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-27 22:23:51
为毛非要用酵母表达,如果e coli可以搞定那不是更加简单省钱...

大哥,那是膜蛋白。要有活性的
科研穷三代,读博毁一生啊
5楼2012-06-27 22:31:08
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月月大可

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by anlehyyy at 2012-06-27 22:31:08
大哥,那是膜蛋白。要有活性的...

我做蛋白表达多年,没觉得酵母多牛,也没觉的膜蛋白就不能用大肠杆菌表达。
6楼2012-06-28 15:07:10
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
6楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-28 15:07:10
我做蛋白表达多年,没觉得酵母多牛,也没觉的膜蛋白就不能用大肠杆菌表达。...

膜蛋白不好纯化的,要是大肠杆菌,蛋白基本都是在细胞碎片上,酵母没做过,不知道。
7楼2012-06-28 16:38:02
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anlehyyy

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-28 15:07:10
我做蛋白表达多年,没觉得酵母多牛,也没觉的膜蛋白就不能用大肠杆菌表达。...

我也没说酵母牛,是你自己觉得吧。
科研穷三代,读博毁一生啊
8楼2012-06-28 16:54:01
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月月大可

木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-28 16:38:02
膜蛋白不好纯化的,要是大肠杆菌,蛋白基本都是在细胞碎片上,酵母没做过,不知道。...

膜蛋白的纯化难度在于去污剂的应用上。不管是大肠杆菌还是酵母,如果该蛋白表达出来能定外在膜上,都是在细胞碎片中。如果不能,大肠杆菌中就是包涵体。 如果是包涵体纯化起来反而简单,直接洗一洗就比较纯,变复性后再随便用个亲和柱,一般的实验要求就都够了,有些甚至能达到95%以上。
9楼2012-06-28 18:30:07
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-28 18:30:07
膜蛋白的纯化难度在于去污剂的应用上。不管是大肠杆菌还是酵母,如果该蛋白表达出来能定外在膜上,都是在细胞碎片中。如果不能,大肠杆菌中就是包涵体。 如果是包涵体纯化起来反而简单,直接洗一洗就比较纯,变复性 ...

我觉得,定位的话就胶检就很清楚了。
在膜上的话,基本就是detergent的选择的问题了,说实话,我遇到过,不过惭愧,没做出来。
包涵体纯化其实得到蛋白都是简单的,关键是,如果要求活性的话,就相对麻烦了,其实有的蛋白在形成了包涵体,就可以宣告后面不用做了。
10楼2012-06-28 20:03:16
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