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月月大可

木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-28 20:03:16
我觉得,定位的话就胶检就很清楚了。
在膜上的话,基本就是detergent的选择的问题了,说实话,我遇到过,不过惭愧,没做出来。
包涵体纯化其实得到蛋白都是简单的,关键是,如果要求活性的话,就相对麻烦了,其实 ...

如果水溶蛋白是包涵体,我也认同基本无望,虽然有成功复性的例子,但是我的概念中这种情况基本就是死路。
不过我们现在都在搞膜蛋白,表达出来就是包涵体,复性后加超速离心分离,做的很成功。
11楼2012-06-29 13:34:54
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 月月大可 at 2012-06-29 13:34:54
如果水溶蛋白是包涵体,我也认同基本无望,虽然有成功复性的例子,但是我的概念中这种情况基本就是死路。
不过我们现在都在搞膜蛋白,表达出来就是包涵体,复性后加超速离心分离,做的很成功。...

恩,真佩服你,我看见膜蛋白都发憷。
对了,你们的膜蛋白是在细胞碎片上的么?是跨膜的么?多交流啊。
12楼2012-06-29 14:25:35
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

要合成整条蛋白序列,比较困难吧。最好还是合成基因进行表达,宿主菌可以选用C41或C43,据说是专门表达膜蛋白的。纯化的话可以融合一段多角体蛋白,比较容易,可以查查这方面的文献
13楼2013-02-28 08:50:31
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