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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

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在大肠杆菌中表达的蛋白质也不一定都形成包涵体。

包涵体形成的原因:
1.在重组蛋白质的表达过程中缺乏某些蛋白质折叠所需要的帮助因子,因而无法形成正确的次级键。
2.外源基因合成速度太快,没有时间进行进行折叠,二硫键不能正确地配对,过多的蛋白质间的非特异性结合,蛋白质无法达到足够的溶解度。
3.重组蛋白质的一级结构也与包涵体的形成有关,一般说含Cys和Met越多的蛋白质越容易形成包涵体;Pro含量明显与包涵体的形成呈现正相关,可能是因为Pro和Hypro破坏alpha-helix,而alpha-helix有一定机械硬度,可以足额蛋白质分子彼此靠近。
5.重组蛋白质在细胞内的环境不适,在发酵温度高和细胞内的pH值接近该蛋白质等电点时容易形包涵体。

在大肠杆菌中表达的膜蛋白如果不满足以上条件,也不会形成包涵体,而且由于其有细胞膜等位序列,应该可以定位到大肠杆菌的细胞膜上。
11楼2013-07-06 14:38:21
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

大肠杆菌的细胞膜也有部分真核细胞的内质网和线粒体的功能。
12楼2013-07-06 14:40:48
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aoda123

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我做的膜蛋白在BL21中没有表达,而且表达很不稳定
身体健康,工作顺利
13楼2013-07-30 09:45:45
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ginnyzhuzhu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 生物小通 at 2013-07-04 23:19:07
我做的也是膜蛋白,真核中定位高尔基体和细胞膜,原核中有可溶性表达,至于定位不清楚。纯化也没太大问题。这个东西看自己吧,在我们这里很多老实说不太可能成功的被许多新手就做成功了,相信自己。

求指导!!!我也在做,但是木有成功啊
14楼2014-05-09 15:38:37
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