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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 蛋白包涵体纯化后，复性缓冲液用什么呢？急急急
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ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 蛋白包涵体纯化后，复性缓冲液用什么呢？急急急 已有1人参与

我现在在做镍柱亲和层析，小量纯化，但是目的带在包涵体中表达，我是先将包涵体变性，变性剂用不同PH的尿毒，纯化后再复性，复性方法有很多种，我是用PH8.0尿毒进行梯度复性的：6M尿素（24h）----4M尿素（12h）----2M尿素（12h）----0.5M尿素（12h）--------PBS（12h）.
但是查有关资料，发现有的人复性用的是：6M尿素PBS缓冲液（24h）----4M尿素PBS缓冲液（12h）----2M尿素PBS缓冲液（12h）----0M尿素PBS缓冲液（12h
这2种方法是都可以吗？还是有一个是错的呢？最后复性完都不用在无菌水里面再洗吗？
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1楼 2014-04-11 10:37:47
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wolfman840

木虫 (正式写手)
这两个方法是一样的，或者你还可以一步到位用透析。
一般用水的话，不能保证pH值，没有缓冲盐对蛋白的保护了。
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ljj0720
5楼2014-07-03 13:34:34
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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ljj0720: 金币+5, ★有帮助 2014-04-11 12:24:39
我表示略微不懂
两个方案不是一样的吗？
尿素是溶解到PBS里然后才用吧
所以两个方案一模一样啊。
还有，做蛋白，很少直接加水的，一般都加pbs这个缓冲液，这是个溶剂，起溶解保护试剂的作用。
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天行健
2楼2014-04-11 11:51:09
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ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-04-11 11:51:09
我表示略微不懂
两个方案不是一样的吗？
尿素是溶解到PBS里然后才用吧
所以两个方案一模一样啊。
还有，做蛋白，很少直接加水的，一般都加pbs这个缓冲液，这是个溶剂，起溶解保护试剂的作用。

不是 我现在用第一种方案做的，是用水溶解的尿素,这样对蛋白有影响吗？
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3楼2014-04-11 12:24:15
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biology-girl

新虫 (正式写手)
蛋白复性这么麻烦 你不如好好摸索一下 如何让他以可溶性的形式表达。
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4楼2014-06-16 09:32:50
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