24小时热门版块排行榜    

查看: 2476  |  回复: 5

ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 蛋白包涵体纯化后,复性缓冲液用什么呢?急急急 已有1人参与

我现在在做镍柱亲和层析,小量纯化,但是目的带在包涵体中表达,我是先将包涵体变性,变性剂用不同PH的尿毒,纯化后再复性,复性方法有很多种,我是用PH8.0尿毒进行梯度复性的:6M尿素(24h)----4M尿素(12h)----2M尿素(12h)----0.5M尿素(12h)--------PBS(12h).
但是查有关资料,发现有的人复性用的是:6M尿素PBS缓冲液(24h)----4M尿素PBS缓冲液(12h)----2M尿素PBS缓冲液(12h)----0M尿素PBS缓冲液(12h
这2种方法是都可以吗?还是有一个是错的呢?最后复性完都不用在无菌水里面再洗吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ljj0720: 金币+5, 有帮助 2014-04-11 12:24:39
我表示略微不懂
两个方案不是一样的吗?
尿素是溶解到PBS里然后才用吧
所以两个方案一模一样啊。
还有,做蛋白,很少直接加水的,一般都加pbs这个缓冲液,这是个溶剂,起溶解保护试剂的作用。
天行健
2楼2014-04-11 11:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-04-11 11:51:09
我表示略微不懂
两个方案不是一样的吗?
尿素是溶解到PBS里然后才用吧
所以两个方案一模一样啊。
还有,做蛋白,很少直接加水的,一般都加pbs这个缓冲液,这是个溶剂,起溶解保护试剂的作用。

不是 我现在用第一种方案做的,是用水溶解的尿素,这样对蛋白有影响吗?
3楼2014-04-11 12:24:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biology-girl

新虫 (正式写手)

蛋白复性这么麻烦 你不如好好摸索一下 如何让他以可溶性的形式表达。
4楼2014-06-16 09:32:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

这两个方法是一样的,或者你还可以一步到位用透析。
一般用水的话,不能保证pH值,没有缓冲盐对蛋白的保护了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2014-07-03 13:34:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-07-03 13:34:34
这两个方法是一样的,或者你还可以一步到位用透析。
一般用水的话,不能保证pH值,没有缓冲盐对蛋白的保护了。

恩 明白了  谢谢大侠
6楼2014-07-04 07:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ljj0720 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +7 不知道叫什么! 2026-03-15 8/400 2026-03-15 20:11 by 棒棒球手
[考研] 290求调剂 +3 孔志浩 2026-03-12 8/400 2026-03-15 15:30 by 孔志浩
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家,不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 化学工程321分求调剂(南京工业,浙江工业) +3 大米饭! 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:34 by JourneyLucky
[考研] 306求调剂 +4 唐薏薏 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:19 by JourneyLucky
[考研] 环境调剂 +6 晓看天暮看云 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中农业大学071010,总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
[考研] 一志愿:武汉理工,材料工程,英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
请填处理意见