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关于包涵体复性百分之80%全部沉淀,求指教。
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| 小弟在做包涵体复性时,开始是用6M盐酸胍溶解,后经镍柱螯合后换成8M尿素缓冲液,后面复性时问题就来了,变性蛋白只要离开8M尿素就开始沉淀,做过阶段透析就是先从8M过渡到4M,再到2M或者直接到TRIS-HCL,PH8.5缓冲液里,蛋白大部分沉淀,想请教关于这种不稳定蛋白应如何选择体系,之前试过加0.02%吐温80,和5%甘油,PEG,GLY无论是稀释还是透析,结果均不理想大量沉淀,收率过低。该蛋白正确复性后其水溶性较好,不知道什么原因包涵体如此不稳定。如果用其他表面活性剂后面可能难以进行纯化。不知道如何是好?请高手指教。如果用盐酸胍复性是不是能好些? |
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