应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于包涵体复性百分之80%全部沉淀，求指教。
61/1返回列表
查看: 1823  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

落满夏天

银虫 (正式写手)

[交流] 关于包涵体复性百分之80%全部沉淀，求指教。

小弟在做包涵体复性时，开始是用6M盐酸胍溶解，后经镍柱螯合后换成8M尿素缓冲液，后面复性时问题就来了，变性蛋白只要离开8M尿素就开始沉淀，做过阶段透析就是先从8M过渡到4M，再到2M或者直接到TRIS-HCL，PH8.5缓冲液里，蛋白大部分沉淀，想请教关于这种不稳定蛋白应如何选择体系，之前试过加0.02%吐温80，和5%甘油，PEG，GLY无论是稀释还是透析，结果均不理想大量沉淀，收率过低。该蛋白正确复性后其水溶性较好，不知道什么原因包涵体如此不稳定。如果用其他表面活性剂后面可能难以进行纯化。不知道如何是好？请高手指教。如果用盐酸胍复性是不是能好些？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2014-02-17 20:47:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-18 08:25:18
请参考Frangioni等，好像是199x年的论文，Analytical Chemistry
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-18 06:25:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
沉淀是在什么阶段发生的？为什么一开始不用8M Urea 直接变性上柱呢？盐浓度是多少呢？
建议你做一下8M到6M的透析，看看还是不是一样沉淀？同时在换成非Urea缓冲系统时候在缓冲液中提高盐浓度。
赞一下 回复此楼
3楼2014-02-18 16:01:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落满夏天

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2014-02-18 16:01:10
沉淀是在什么阶段发生的？为什么一开始不用8M Urea 直接变性上柱呢？盐浓度是多少呢？
建议你做一下8M到6M的透析，看看还是不是一样沉淀？同时在换成非Urea缓冲系统时候在缓冲液中提高盐浓度。

离开8M尿素就会产生沉淀，原来想用尿素变性，但是效果不是很好，会有沉淀，这个包涵体很不稳定。最后盐浓度也就是tris-hcl浓度到多少合适？20NM？
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-19 12:07:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 落满夏天 at 2014-02-19 12:07:25
离开8M尿素就会产生沉淀，原来想用尿素变性，但是效果不是很好，会有沉淀，这个包涵体很不稳定。最后盐浓度也就是tris-hcl浓度到多少合适？20NM？...

就是你从8M开始透析成tris缓冲液的盐浓度。你可以配成1M的NaCL试试。
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-19 12:36:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极道始之魔

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我最近也在做包涵体复性的实验，不知道这个复兴率有多少，不可能百分百的，所以我的透析完后，还是会出现少量的沉淀。整体看上去有点极淡蓝色的感觉，不知道是不是可溶的就是复性成功的。另外，做得是一个融合蛋白，也不知道酶切融合蛋白产生的目的蛋白就是复性好的。另外，发现在目的蛋白下面多出了1条带，不知道是降解了还是怎么的，一般蛋白不会降解的，是不是复性成功的蛋白和没复性成功的蛋白会跑出来不一样的条带
赞一下 回复此楼
6楼2014-02-19 14:08:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 落满夏天 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +19 koalala 2026-08-24 21/1050 2026-08-24 16:48 by Wei_ren
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +3 图啦图啦 2026-08-24 3/150 2026-08-24 16:43 by GZUZM
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 我面上完蛋了 +8 且听虎啸 2026-08-20 9/450 2026-08-24 13:52 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭