24小时热门版块排行榜    

查看: 1782  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

落满夏天

银虫 (正式写手)


[交流] 关于包涵体复性百分之80%全部沉淀,求指教。

小弟在做包涵体复性时,开始是用6M盐酸胍溶解,后经镍柱螯合后换成8M尿素缓冲液,后面复性时问题就来了,变性蛋白只要离开8M尿素就开始沉淀,做过阶段透析就是先从8M过渡到4M,再到2M或者直接到TRIS-HCL,PH8.5缓冲液里,蛋白大部分沉淀,想请教关于这种不稳定蛋白应如何选择体系,之前试过加0.02%吐温80,和5%甘油,PEG,GLY无论是稀释还是透析,结果均不理想大量沉淀,收率过低。该蛋白正确复性后其水溶性较好,不知道什么原因包涵体如此不稳定。如果用其他表面活性剂后面可能难以进行纯化。不知道如何是好?请高手指教。如果用盐酸胍复性是不是能好些?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

极道始之魔

银虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我最近也在做包涵体复性的实验,不知道这个复兴率有多少,不可能百分百的,所以我的透析完后,还是会出现少量的沉淀。整体看上去有点极淡蓝色的感觉,不知道是不是可溶的就是复性成功的。另外,做得是一个融合蛋白,也不知道酶切融合蛋白产生的目的蛋白就是复性好的。另外,发现在目的蛋白下面多出了1条带,不知道是降解了还是怎么的,一般蛋白不会降解的,是不是复性成功的蛋白和没复性成功的蛋白会跑出来不一样的条带
6楼2014-02-19 14:08:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

exon2002

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-18 08:25:18
请参考Frangioni等,好像是199x年的论文,Analytical Chemistry
2楼2014-02-18 06:25:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
沉淀是在什么阶段发生的?为什么一开始不用8M Urea 直接变性上柱呢?盐浓度是多少呢?
建议你做一下8M到6M的透析,看看还是不是一样沉淀?同时在换成非Urea缓冲系统时候在缓冲液中提高盐浓度。
3楼2014-02-18 16:01:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

落满夏天

银虫 (正式写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2014-02-18 16:01:10
沉淀是在什么阶段发生的?为什么一开始不用8M Urea 直接变性上柱呢?盐浓度是多少呢?
建议你做一下8M到6M的透析,看看还是不是一样沉淀?同时在换成非Urea缓冲系统时候在缓冲液中提高盐浓度。

离开8M尿素就会产生沉淀,原来想用尿素变性,但是效果不是很好,会有沉淀,这个包涵体很不稳定。最后盐浓度也就是tris-hcl浓度到多少合适?20NM?
4楼2014-02-19 12:07:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 静等基金结果 +6 gjjjzhong 2026-08-10 18/900 2026-08-13 17:25 by JACS/Angew
[文学芳草园] 阿姨 +3 汪汪锅 2026-08-09 3/150 2026-08-13 16:56 by 410610288
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见