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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于包涵体复性百分之80%全部沉淀，求指教。
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落满夏天

银虫 (正式写手)

[交流] 关于包涵体复性百分之80%全部沉淀，求指教。

小弟在做包涵体复性时，开始是用6M盐酸胍溶解，后经镍柱螯合后换成8M尿素缓冲液，后面复性时问题就来了，变性蛋白只要离开8M尿素就开始沉淀，做过阶段透析就是先从8M过渡到4M，再到2M或者直接到TRIS-HCL，PH8.5缓冲液里，蛋白大部分沉淀，想请教关于这种不稳定蛋白应如何选择体系，之前试过加0.02%吐温80，和5%甘油，PEG，GLY无论是稀释还是透析，结果均不理想大量沉淀，收率过低。该蛋白正确复性后其水溶性较好，不知道什么原因包涵体如此不稳定。如果用其他表面活性剂后面可能难以进行纯化。不知道如何是好？请高手指教。如果用盐酸胍复性是不是能好些？
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1楼 2014-02-17 20:47:29
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2014-02-18 08:25:18
请参考Frangioni等，好像是199x年的论文，Analytical Chemistry
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2楼2014-02-18 06:25:34
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