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ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 蛋白包涵体纯化后,复性缓冲液用什么呢?急急急 已有1人参与

我现在在做镍柱亲和层析,小量纯化,但是目的带在包涵体中表达,我是先将包涵体变性,变性剂用不同PH的尿毒,纯化后再复性,复性方法有很多种,我是用PH8.0尿毒进行梯度复性的:6M尿素(24h)----4M尿素(12h)----2M尿素(12h)----0.5M尿素(12h)--------PBS(12h).
但是查有关资料,发现有的人复性用的是:6M尿素PBS缓冲液(24h)----4M尿素PBS缓冲液(12h)----2M尿素PBS缓冲液(12h)----0M尿素PBS缓冲液(12h
这2种方法是都可以吗?还是有一个是错的呢?最后复性完都不用在无菌水里面再洗吗?
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youlinglyw

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ljj0720: 金币+5, 有帮助 2014-04-11 12:24:39
我表示略微不懂
两个方案不是一样的吗?
尿素是溶解到PBS里然后才用吧
所以两个方案一模一样啊。
还有,做蛋白,很少直接加水的,一般都加pbs这个缓冲液,这是个溶剂,起溶解保护试剂的作用。
天行健
2楼2014-04-11 11:51:09
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ljj0720

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-04-11 11:51:09
我表示略微不懂
两个方案不是一样的吗?
尿素是溶解到PBS里然后才用吧
所以两个方案一模一样啊。
还有,做蛋白,很少直接加水的,一般都加pbs这个缓冲液,这是个溶剂,起溶解保护试剂的作用。

不是 我现在用第一种方案做的,是用水溶解的尿素,这样对蛋白有影响吗?
3楼2014-04-11 12:24:15
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biology-girl

新虫 (正式写手)

蛋白复性这么麻烦 你不如好好摸索一下 如何让他以可溶性的形式表达。
4楼2014-06-16 09:32:50
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wolfman840

木虫 (正式写手)

这两个方法是一样的,或者你还可以一步到位用透析。
一般用水的话,不能保证pH值,没有缓冲盐对蛋白的保护了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

5楼2014-07-03 13:34:34
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ljj0720

银虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-07-03 13:34:34
这两个方法是一样的,或者你还可以一步到位用透析。
一般用水的话,不能保证pH值,没有缓冲盐对蛋白的保护了。

恩 明白了  谢谢大侠
6楼2014-07-04 07:33:25
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