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flord

铁虫 (小有名气)

[求助] 基因组DNA有RNA污染 已有2人参与

各位大侠好:
        本小虫拟克隆启动子,然提取的基因组DNA有RNA污染,且RNA条带很亮。现有两种方法除掉RNA:
        1、加RNase A,重新用氯仿:异戊醇再次抽提;
        2、切胶回收基因组DNA条带,去除RNA。
        请问各位大侠这两种方法的利弊,用哪一种得到的DNA作为后续启动子克隆的模版更好。
        谢谢,感激不尽!
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一个阳光的大男孩!
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
flord: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-08 18:14:54
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-08 19:21:38
RNA对克隆启动子没有什么影响的,启动子又不会转录出来,直接用你的引物做PCR就行。最多就加点RNA酶37度放一两个小时。要是真的想多点事做,那就抽提吧,回收就免了,一般的回收试剂盒都是针对小片段的,整个基因组回收很少见。
3楼2014-04-08 15:18:35
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查看全部 7 个回答

biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
flord: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢,说的很有道理。 2014-04-08 18:14:20
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-08 19:21:10
加点RNaseA,有RNaseA/T1更好。
原则上DNA有RNA污染不太影响PCR,当然了,太多了可能会相对稀释引物。
实用的角度可以先拿去P一个看看。
基因组DNA是smear状的,胶回收可能不太好切带,而且基因组DNA讲究完整性,这样搞来搞去肯定有破坏。
2楼2014-04-08 15:16:48
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Neo2000

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liuderong at 2014-04-08 15:18:35
RNA对克隆启动子没有什么影响的,启动子又不会转录出来,直接用你的引物做PCR就行。最多就加点RNA酶37度放一两个小时。要是真的想多点事做,那就抽提吧,回收就免了,一般的回收试剂盒都是针对小片段的,整个基因组 ...

直接PCR就好,一点不影响

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-04-08 20:27:50
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3326449

木虫 (著名写手)

真好学啊,小伙!
5楼2014-04-09 10:36:16
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