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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 基因组DNA有RNA污染
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flord

铁虫 (小有名气)

[求助] 基因组DNA有RNA污染 已有2人参与

各位大侠好：
        本小虫拟克隆启动子，然提取的基因组DNA有RNA污染，且RNA条带很亮。现有两种方法除掉RNA：
        1、加RNase A，重新用氯仿:异戊醇再次抽提；
        2、切胶回收基因组DNA条带，去除RNA。
        请问各位大侠这两种方法的利弊，用哪一种得到的DNA作为后续启动子克隆的模版更好。
        谢谢，感激不尽！
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cxkhhh

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一个阳光的大男孩！
1楼 2014-04-08 14:44:44
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
flord: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-08 18:14:54
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-08 19:21:38
RNA对克隆启动子没有什么影响的，启动子又不会转录出来，直接用你的引物做PCR就行。最多就加点RNA酶37度放一两个小时。要是真的想多点事做，那就抽提吧，回收就免了，一般的回收试剂盒都是针对小片段的，整个基因组回收很少见。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2014-04-08 15:18:35
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
flord: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢，说的很有道理。 2014-04-08 18:14:20
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-08 19:21:10
加点RNaseA，有RNaseA/T1更好。
原则上DNA有RNA污染不太影响PCR，当然了，太多了可能会相对稀释引物。
实用的角度可以先拿去P一个看看。
基因组DNA是smear状的，胶回收可能不太好切带，而且基因组DNA讲究完整性，这样搞来搞去肯定有破坏。
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2楼2014-04-08 15:16:48
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Neo2000

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuderong at 2014-04-08 15:18:35
RNA对克隆启动子没有什么影响的，启动子又不会转录出来，直接用你的引物做PCR就行。最多就加点RNA酶37度放一两个小时。要是真的想多点事做，那就抽提吧，回收就免了，一般的回收试剂盒都是针对小片段的，整个基因组 ...

直接PCR就好，一点不影响

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-04-08 20:27:50
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3326449

木虫 (著名写手)
真好学啊，小伙！
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5楼2014-04-09 10:36:16
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