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dirkyoung

金虫 (正式写手)

[求助] 跑蛋白胶出现问题 已有1人参与

做western有段时间了,但从来没见过胶跑成这样。但是最近连续三次跑胶成这个样子,第一次出问题和没出问题的时候仅仅隔了一天(语死早,自己这话都说的纠结)。求大神分析。用的是15kd到170kd的那种marker,15kd的marker是绿色的,但是已经模糊不清,溴酚蓝也极其难看。因为同时需要大蛋白和小蛋白,因此做了这种梯度浓度的分离胶。

跑蛋白胶出现问题
图片1.jpg
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dirkyoung

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-04 16:46:31
1.浓缩胶太短了,建议配长点,压缩效果会好点。
2. 跑到12%的胶的时候电压用的是多少?建议需要大于120V,要不然在12%的胶里面跑不动。
3. 在进行上样电泳之前,建议先进行预电泳,就是加上缓冲液让胶空跑,我曾经 ...

我发现是ph8.8的tris出问题了,虽然之前tris测过ph没变化,但重新配新的tris后问题就解决了。只是不知道为什么tris会出问题,一直在用来着。让胶空跑这个我还真没听说过,挺新鲜,下次试试。你一般空跑多久呢?
3楼2014-04-06 23:07:37
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.浓缩胶太短了,建议配长点,压缩效果会好点。
2. 跑到12%的胶的时候电压用的是多少?建议需要大于120V,要不然在12%的胶里面跑不动。
3. 在进行上样电泳之前,建议先进行预电泳,就是加上缓冲液让胶空跑,我曾经试过,效果不过。
2楼2014-04-04 16:46:31
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