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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 跑蛋白胶出现问题
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dirkyoung

金虫 (正式写手)

[求助] 跑蛋白胶出现问题 已有1人参与

做western有段时间了，但从来没见过胶跑成这样。但是最近连续三次跑胶成这个样子，第一次出问题和没出问题的时候仅仅隔了一天（语死早，自己这话都说的纠结）。求大神分析。用的是15kd到170kd的那种marker，15kd的marker是绿色的，但是已经模糊不清，溴酚蓝也极其难看。因为同时需要大蛋白和小蛋白，因此做了这种梯度浓度的分离胶。

跑蛋白胶出现问题
图片1.jpg
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1楼 2014-04-04 14:58:41
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.浓缩胶太短了，建议配长点，压缩效果会好点。
2. 跑到12%的胶的时候电压用的是多少？建议需要大于120V，要不然在12%的胶里面跑不动。
3. 在进行上样电泳之前，建议先进行预电泳，就是加上缓冲液让胶空跑，我曾经试过，效果不过。
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2楼2014-04-04 16:46:31
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dirkyoung

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-04 16:46:31
1.浓缩胶太短了，建议配长点，压缩效果会好点。
2. 跑到12%的胶的时候电压用的是多少？建议需要大于120V，要不然在12%的胶里面跑不动。
3. 在进行上样电泳之前，建议先进行预电泳，就是加上缓冲液让胶空跑，我曾经 ...

我发现是ph8.8的tris出问题了，虽然之前tris测过ph没变化，但重新配新的tris后问题就解决了。只是不知道为什么tris会出问题，一直在用来着。让胶空跑这个我还真没听说过，挺新鲜，下次试试。你一般空跑多久呢？
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3楼2014-04-06 23:07:37
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