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1楼2014-03-21 14:02:25

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dalaoguo8264

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【答案】应助回帖

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silicare: 金币+10, BioEPI+1, 鼓励信息反馈 2014-03-25 17:41:03

各位虫虫们，我找到原因了，加用了2-巯基乙醇后，内参跑出来非常漂亮啦，哈哈

赞一下(1人)

12楼2014-03-25 13:34:09

普通回帖

2008liulin

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若Actin 为42 你的Marker显示在 40 50 之间，则，一抗有问题了，降解，请新配抗体实验。

2楼2014-03-21 14:10:03

dalaoguo8264

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2楼: Originally posted by 2008liulin at 2014-03-21 14:10:03
若Actin 为42 你的Marker显示在 40 50 之间，则，一抗有问题了，降解，请新配抗体实验。

我用了其他同学的1年前的蛋白样品，跑出来的还不错，考虑是不是我的蛋白出了问题

3楼2014-03-21 14:15:03

dalaoguo8264

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我用的是5%的浓缩胶，12%的分离胶，上样量15μl，电泳开始时电压80V，跑了1h，然后调到160V，大约50min。
我用同学的1年前的蛋白样跑出来就不错

6.jpg

4楼2014-03-21 14:19:01

jiaolong11a

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dalaoguo8264: 金币+1, ★有帮助 2014-03-21 14:55:07

蛋白没提好，样品是什么材料，脂肪多貌似也会造成这样，

多情总被无情扰。。。愁

5楼2014-03-21 14:33:18

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5楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-03-21 14:33:18
蛋白没提好，样品是什么材料，脂肪多貌似也会造成这样，

培养的细胞系，提取的细胞总蛋白，我现在也考虑是蛋白样品的问题

6楼2014-03-21 14:55:48

Limei！

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可能是一抗浓度太高了，建议稀释一抗试一下

7楼2014-03-22 09:26:43

dalaoguo8264

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7楼: Originally posted by Limei！ at 2014-03-22 09:26:43
可能是一抗浓度太高了，建议稀释一抗试一下

一抗是1:5000

8楼2014-03-24 07:33:01

2008liulin

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4楼: Originally posted by dalaoguo8264 at 2014-03-21 14:19:01
我用的是5%的浓缩胶，12%的分离胶，上样量15μl，电泳开始时电压80V，跑了1h，然后调到160V，大约50min。
我用同学的1年前的蛋白样跑出来就不错

6.jpg
...

此蛋白不错，只跑Actin 不用这么费事的，随便跑跑显影就是了

9楼2014-03-24 18:54:37

dalaoguo8264

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9楼: Originally posted by 2008liulin at 2014-03-24 18:54:37
此蛋白不错，只跑Actin 不用这么费事的，随便跑跑显影就是了...

这幅图是1年前的旧蛋白跑出来的，所以效果好，我是想问问第一幅图为什么会跑的这么诡异，呵呵

10楼2014-03-24 19:00:20