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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)

[求助] 求助各位大虫，我的SDS-PAGE跑出来的Actin，诡异 已有3人参与

用的是DAB显色法，怎么会跑 出这样诡异的图片，实验室的同学都没见过

求助各位大虫，我的SDS-PAGE跑出来的Actin，诡异
1.jpg
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1楼 2014-03-21 14:02:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

dalaoguo8264

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare: 金币+10, BioEPI+1, 鼓励信息反馈 2014-03-25 17:41:03
各位虫虫们，我找到原因了，加用了2-巯基乙醇后，内参跑出来非常漂亮啦，哈哈
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12楼2014-03-25 13:34:09
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普通回帖

2008liulin

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
若Actin 为42 你的Marker显示在 40 50 之间，则，一抗有问题了，降解，请新配抗体实验。
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2楼2014-03-21 14:10:03
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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 2008liulin at 2014-03-21 14:10:03
若Actin 为42 你的Marker显示在 40 50 之间，则，一抗有问题了，降解，请新配抗体实验。

我用了其他同学的1年前的蛋白样品，跑出来的还不错，考虑是不是我的蛋白出了问题
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3楼2014-03-21 14:15:03
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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)
我用的是5%的浓缩胶，12%的分离胶，上样量15μl，电泳开始时电压80V，跑了1h，然后调到160V，大约50min。
我用同学的1年前的蛋白样跑出来就不错
求助各位大虫，我的SDS-PAGE跑出来的Actin，诡异-1
6.jpg
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4楼2014-03-21 14:19:01
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dalaoguo8264: 金币+1, ★有帮助 2014-03-21 14:55:07
蛋白没提好，样品是什么材料，脂肪多貌似也会造成这样，
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多情总被无情扰。。。愁
5楼2014-03-21 14:33:18
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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiaolong11a at 2014-03-21 14:33:18
蛋白没提好，样品是什么材料，脂肪多貌似也会造成这样，

培养的细胞系，提取的细胞总蛋白，我现在也考虑是蛋白样品的问题
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6楼2014-03-21 14:55:48
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Limei！

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是一抗浓度太高了，建议稀释一抗试一下
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7楼2014-03-22 09:26:43
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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Limei！ at 2014-03-22 09:26:43
可能是一抗浓度太高了，建议稀释一抗试一下

一抗是1:5000
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8楼2014-03-24 07:33:01
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2008liulin

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dalaoguo8264 at 2014-03-21 14:19:01
我用的是5%的浓缩胶，12%的分离胶，上样量15μl，电泳开始时电压80V，跑了1h，然后调到160V，大约50min。
我用同学的1年前的蛋白样跑出来就不错

6.jpg
...

此蛋白不错 ，只跑Actin 不用这么费事的，随便跑跑显影就是了
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9楼2014-03-24 18:54:37
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dalaoguo8264

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 2008liulin at 2014-03-24 18:54:37
此蛋白不错 ，只跑Actin 不用这么费事的，随便跑跑显影就是了...

这幅图是1年前的旧蛋白跑出来的，所以效果好，我是想问问第一幅图为什么会跑的这么诡异，呵呵
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10楼2014-03-24 19:00:20
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