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xjldemon

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段的载体连接,急已有1人参与

最近在做基因回补,可能是回补的基因太大了,载体一直都构不出来。基因有近7K,一起做的有5.3K的连上了。试过4度过夜,16度过夜,22度过夜,都不行。DNA量定量的,片段:载体摩尔比 7:1.     涂板后  不是不长,长得少,挑的时候倒也挺像是勾出来的,扩目标带有弱带,但一提质粒检测,质粒的大小根本没变化,挑了100多个了都是假阳性。连接酶是fermatas的快速连接酶,质粒5K。

大片段的载体连接,急
检测目标基因的图.png


大片段的载体连接,急-1
提质粒后单酶切 酶切.png
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jiajiav1991

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

提的质粒是多少浓度的?浓度过小连接效率低,浓度过大单酶切可能不完全,所以掌握好浓度是比较重要的。
我不想站得多高,看得多远,只想做好手上的每一件事。
2楼2014-09-05 07:37:08
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