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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 大片段的载体连接，急
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xjldemon

新虫 (初入文坛)

[求助] 大片段的载体连接，急 已有1人参与

最近在做基因回补，可能是回补的基因太大了，载体一直都构不出来。基因有近7K，一起做的有5.3K的连上了。试过4度过夜，16度过夜，22度过夜，都不行。DNA量定量的，片段：载体摩尔比 7:1.     涂板后  不是不长，长得少，挑的时候倒也挺像是勾出来的，扩目标带有弱带，但一提质粒检测，质粒的大小根本没变化，挑了100多个了都是假阳性。连接酶是fermatas的快速连接酶，质粒5K。

大片段的载体连接，急
检测目标基因的图.png


大片段的载体连接，急-1
提质粒后单酶切 酶切.png
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1楼 2014-03-20 23:38:49
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jiajiav1991

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

提的质粒是多少浓度的？浓度过小连接效率低，浓度过大单酶切可能不完全，所以掌握好浓度是比较重要的。
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我不想站得多高，看得多远，只想做好手上的每一件事。
2楼2014-09-05 07:37:08
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