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wenrongti

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[求助] 细菌超声破碎之后，破碎液中的酶没有活性。已有5人参与

我的菌在全细胞的时候，对我的底物是可以转化的，但是细菌超声破碎之后，对破碎液中的酶就行酶活测试，却发现对我的底物没有任何转化效果，这究竟是什么原因呢？我是直接在破碎液中就行酶活测试的，即用破碎液做参比，在离过心的稀释了一定倍数的破碎液中加入我的底物，然后在紫外进行全波段扫描，在20min内吸收曲线没有任何变化。而且如果破碎液不进行稀释的话，压根就没有吸收峰出现，这到底是什么原因？？？请教下大家~~

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1楼 2014-03-19 16:29:36

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wenrongti

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引用回帖:

2楼: Originally posted by zhuzhaoyang at 2014-03-19 18:29:10
你这问题复杂了，有几方面的原因要考虑：
1、超声破碎的时候酶有没有失活？超声破碎一般要冰浴的，并且选择合适的超声功率和超声工作时间间歇时间和工作总时间，这个要通过实验验证；
2、超声破胞液一般悬浮物含量 ...

是的，底物和产物在紫外肯定有明显吸收的，稀释100-1000倍会不会稀释的倍数太高了，我稀释5倍左右就有了吸收峰，但就是一直不降，超声破碎工作和间歇时间你一般设置多少？另外，你有用过辅酶吗？辅酶到底如何使用呢？