| 查看: 3117 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
细菌超声破碎之后，破碎液中的酶没有活性。 已有5人参与
|
||
| 我的菌在全细胞的时候，对我的底物是可以转化的，但是细菌超声破碎之后，对破碎液中的酶就行酶活测试，却发现对我的底物没有任何转化效果，这究竟是什么原因呢？我是直接在破碎液中就行酶活测试的，即用破碎液做参比，在离过心的稀释了一定倍数的破碎液中加入我的底物，然后在紫外进行全波段扫描，在20min内吸收曲线没有任何变化。而且如果破碎液不进行稀释的话，压根就没有吸收峰出现，这到底是什么原因？？？请教下大家~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
论文终于录用啦！满足毕业条件了
已经有17人回复
-
不自信的我
已经有5人回复
-
磺酰氟产物，毕不了业了！
已经有4人回复
-
投稿Elsevier的杂志（返修），总是在选择OA和subscription界面被踢皮球
已经有8人回复
11楼2014-03-20 21:55:31
zhuzhaoyang
新虫 (初入文坛)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 181.9
- 帖子: 11
- 在线: 10.9小时
- 虫号: 3049818
- 注册: 2014-03-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+4, 鼓励热心应助交流！ 2014-03-19 21:50:40
wenrongti: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-20 09:43:35
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+4, 鼓励热心应助交流！ 2014-03-19 21:50:40
wenrongti: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-20 09:43:35
|
你这问题复杂了，有几方面的原因要考虑： 1、超声破碎的时候酶有没有失活？超声破碎一般要冰浴的，并且选择合适的超声功率和超声工作时间间歇时间和工作总时间，这个要通过实验验证； 2、超声破胞液一般悬浮物含量很多，透光率很低的，不能直接进行紫外测定，要通过一定的稀释，一般我都是进行100-1000倍的稀释，测酶活的时候稀释后的破胞酶液一般在5ml的反应体系里面加入100ul，这样不至于悬浮物影响紫外光的透过，直接用破胞液肯定是不行的； 3、比色皿要注意用石英的，玻璃的是不行的，注意比色皿的清洁度； 4、你确定你的底物和产物是在紫外波段的吸收吗？ |
2楼2014-03-19 18:29:10
3楼2014-03-19 21:31:59
g8339569
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1858.1
- 散金: 127
- 红花: 2
- 帖子: 153
- 在线: 124.1小时
- 虫号: 1055261
- 注册: 2010-07-10
- 性别: GG
- 专业: 微生物资源与分类学
4楼2014-03-19 21:43:45