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细菌超声破碎之后，破碎液中的酶没有活性。 已有5人参与
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| 我的菌在全细胞的时候，对我的底物是可以转化的，但是细菌超声破碎之后，对破碎液中的酶就行酶活测试，却发现对我的底物没有任何转化效果，这究竟是什么原因呢？我是直接在破碎液中就行酶活测试的，即用破碎液做参比，在离过心的稀释了一定倍数的破碎液中加入我的底物，然后在紫外进行全波段扫描，在20min内吸收曲线没有任何变化。而且如果破碎液不进行稀释的话，压根就没有吸收峰出现，这到底是什么原因？？？请教下大家~~ |
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13楼2014-03-20 21:57:29
zhuzhaoyang
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你这问题复杂了，有几方面的原因要考虑： 1、超声破碎的时候酶有没有失活？超声破碎一般要冰浴的，并且选择合适的超声功率和超声工作时间间歇时间和工作总时间，这个要通过实验验证； 2、超声破胞液一般悬浮物含量很多，透光率很低的，不能直接进行紫外测定，要通过一定的稀释，一般我都是进行100-1000倍的稀释，测酶活的时候稀释后的破胞酶液一般在5ml的反应体系里面加入100ul，这样不至于悬浮物影响紫外光的透过，直接用破胞液肯定是不行的； 3、比色皿要注意用石英的，玻璃的是不行的，注意比色皿的清洁度； 4、你确定你的底物和产物是在紫外波段的吸收吗？ |
2楼2014-03-19 18:29:10
3楼2014-03-19 21:31:59
g8339569
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4楼2014-03-19 21:43:45
