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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 细菌超声破碎之后，破碎液中的酶没有活性。
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wenrongti

新虫 (小有名气)

[求助] 细菌超声破碎之后，破碎液中的酶没有活性。 已有5人参与

我的菌在全细胞的时候，对我的底物是可以转化的，但是细菌超声破碎之后，对破碎液中的酶就行酶活测试，却发现对我的底物没有任何转化效果，这究竟是什么原因呢？我是直接在破碎液中就行酶活测试的，即用破碎液做参比，在离过心的稀释了一定倍数的破碎液中加入我的底物，然后在紫外进行全波段扫描，在20min内吸收曲线没有任何变化。而且如果破碎液不进行稀释的话，压根就没有吸收峰出现，这到底是什么原因？？？请教下大家~~
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1楼 2014-03-19 16:29:36
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wenrongti

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhuzhaoyang at 2014-03-19 18:29:10
你这问题复杂了，有几方面的原因要考虑：
1、超声破碎的时候酶有没有失活？超声破碎一般要冰浴的，并且选择合适的超声功率和超声工作时间间歇时间和工作总时间，这个要通过实验验证；
2、超声破胞液一般悬浮物含量 ...

是的，底物和产物在紫外肯定有明显吸收的，稀释100-1000倍会不会稀释的倍数太高了，我稀释5倍左右就有了吸收峰，但就是一直不降，超声破碎工作和间歇时间你一般设置多少？另外，你有用过辅酶吗？辅酶到底如何使用呢？
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5楼2014-03-20 09:43:20
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zhuzhaoyang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+4, 鼓励热心应助交流！ 2014-03-19 21:50:40
wenrongti: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-20 09:43:35
你这问题复杂了，有几方面的原因要考虑：
1、超声破碎的时候酶有没有失活？超声破碎一般要冰浴的，并且选择合适的超声功率和超声工作时间间歇时间和工作总时间，这个要通过实验验证；
2、超声破胞液一般悬浮物含量很多，透光率很低的，不能直接进行紫外测定，要通过一定的稀释，一般我都是进行100-1000倍的稀释，测酶活的时候稀释后的破胞酶液一般在5ml的反应体系里面加入100ul，这样不至于悬浮物影响紫外光的透过，直接用破胞液肯定是不行的；
3、比色皿要注意用石英的，玻璃的是不行的，注意比色皿的清洁度；
4、你确定你的底物和产物是在紫外波段的吸收吗？
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2楼2014-03-19 18:29:10
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月夜饮雪

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wenrongti: 金币+1, ★有帮助 2014-03-20 09:44:37
哥们什么酶？是不是破碎细胞后，该酶被蛋白酶降解了？

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-03-19 21:31:59
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g8339569

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wenrongti: 金币+1, ★有帮助 2014-03-20 09:45:47
大肠里做的表达的话，若产生包涵体不一定有活性

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-03-19 21:43:45
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