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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 小片段DNA的回收问题
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

[求助] 小片段DNA的回收问题 已有3人参与

各位老师，师兄师姐，这两天做胶回收，回收产物的浓度很低只有60ng/ul的样子。用OMEGA的胶回收试剂盒回收，回收效率低。怎么改进使回收效率高点呢？急请教指点，谢谢啦
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没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
1楼 2014-02-24 15:08:45
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 18:29:53
weiyuanzheng: 金币+5, ★★★很有帮助, 很热心 2014-02-27 09:20:09
1.过柱子的时候过3-4次。
2.加elution要预热。
3.胶要完全融。
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2楼2014-02-24 15:24:44
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红茶小麦

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
柱子要用 buffer GPS 预处理，操作步骤试剂盒例应该有说明书
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3楼2014-02-24 16:26:09
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
没用过这个试剂盒，我们用的是另外一个公司的，但是我觉得前一步后最后一步一般可以重复一次
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-02-24 16:32:50
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2014-02-25 09:20:03
谢谢啦，就是加完binding buffer的时候，胶溶解完反复过柱子吗？...

对。我有时候过五六次的都有。但胶要溶解完全，不然堵着柱子就会漏了。
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7楼2014-02-25 09:33:42
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2014-02-25 10:05:07
嗯，我的只有120bp左右的...

像这么短的基因序列是不是可以直接公司合成了啊，回收本来就不好回收哦。
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12楼2014-02-25 18:20:26
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小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 17:09:26
胶充分溶解以后，等晾凉了在过柱子，假如第一次往柱子里加了500ul，离下去了，再倒柱子上离，这样弄三四次，弃掉，在把剩下的加柱子里，在这样重复，然后在加500ul溶胶液离一次，在加wash buffer 离一次，在空甩2min，晾三四分钟，把EB或者ddH2O放65度加热，然后向晾干的柱子里加30ul，静置5到十分钟，离心，然后再吸上来，再离，就OK了
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16楼2014-02-27 18:31:08
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普通回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-24 15:24:44
1.过柱子的时候过3-4次。
2.加elution要预热。
3.胶要完全融。

谢谢啦，就是加完binding buffer的时候，胶溶解完反复过柱子吗？
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没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
5楼2014-02-25 09:20:03
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 红茶小麦 at 2014-02-24 16:26:09
柱子要用 buffer GPS 预处理，操作步骤试剂盒例应该有说明书

嗯，这个可以试一下，对啦，试剂盒里说加等体积的异丙醇，然后过柱，效果怎样？我想用乙醇沉淀法收集一下，这个方法损失率大么？
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没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
6楼2014-02-25 09:21:58
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2014-02-25 09:21:58
嗯，这个可以试一下，对啦，试剂盒里说加等体积的异丙醇，然后过柱，效果怎样？我想用乙醇沉淀法收集一下，这个方法损失率大么？...

好像加异丙醇是在片段小于400bp的时候才加。可能用的试剂盒不是一个公司出的。
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8楼2014-02-25 09:35:14
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-25 09:33:42
对。我有时候过五六次的都有。但胶要溶解完全，不然堵着柱子就会漏了。...

哦，谢谢啦
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没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
9楼2014-02-25 10:04:21
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-25 09:35:14
好像加异丙醇是在片段小于400bp的时候才加。可能用的试剂盒不是一个公司出的。...

嗯，我的只有120bp左右的
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没有人生来洒脱，都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
10楼2014-02-25 10:05:07
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