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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2014-02-25 10:04:21
哦,谢谢啦...

不客气
11楼2014-02-25 11:09:40
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
10楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2014-02-25 10:05:07
嗯,我的只有120bp左右的...

像这么短的基因序列是不是可以直接公司合成了啊,回收本来就不好回收哦。
12楼2014-02-25 18:20:26
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-02-25 18:20:26
像这么短的基因序列是不是可以直接公司合成了啊,回收本来就不好回收哦。...

的确,再试一下吧,谢谢哈
没有人生来洒脱,都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
13楼2014-02-26 11:07:36
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红茶小麦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2014-02-25 09:21:58
嗯,这个可以试一下,对啦,试剂盒里说加等体积的异丙醇,然后过柱,效果怎样?我想用乙醇沉淀法收集一下,这个方法损失率大么?...

这个方法我没有试过,不知道效果怎样啊
14楼2014-02-27 10:57:31
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 红茶小麦 at 2014-02-27 10:57:31
这个方法我没有试过,不知道效果怎样啊...

效果一般般吧,其实也就浓度基本上增加了一倍,损失也挺多的
没有人生来洒脱,都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
15楼2014-02-27 16:10:01
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小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-30 17:09:26
胶充分溶解以后,等晾凉了在过柱子,假如第一次往柱子里加了500ul,离下去了,再倒柱子上离,这样弄三四次,弃掉,在把剩下的加柱子里,在这样重复,然后在加500ul溶胶液离一次,在加wash buffer 离一次,在空甩2min,晾三四分钟,把EB或者ddH2O放65度加热,然后向晾干的柱子里加30ul,静置5到十分钟,离心,然后再吸上来,再离,就OK了
16楼2014-02-27 18:31:08
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白色帝企鹅

新虫 (初入文坛)

我也遇到了这个问题,我的片段是99bp,pcr后回收一次,然后酶切再回收一次,然后就跑胶就看不到带了
17楼2014-02-27 18:42:56
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 白色帝企鹅 at 2014-02-27 18:42:56
我也遇到了这个问题,我的片段是99bp,pcr后回收一次,然后酶切再回收一次,然后就跑胶就看不到带了

强烈建议增加一下模版的浓度,如果20ng/ul左右,20ul体系建议加3-4ul模版。
没有人生来洒脱,都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
18楼2014-02-28 11:03:02
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 小尾巴亚杰 at 2014-02-27 18:31:08
胶充分溶解以后,等晾凉了在过柱子,假如第一次往柱子里加了500ul,离下去了,再倒柱子上离,这样弄三四次,弃掉,在把剩下的加柱子里,在这样重复,然后在加500ul溶胶液离一次,在加wash buffer 离一次,在空甩2mi ...

我也是这样做的,但是不是所有的都很理想,一般还是很难达到200ng/ul
的浓度,可能柱子回收小片段DNA还是有限的吧?之前1000bp左右的目的片段,一次PCR回收浓度都在200-300ng/ul左右的
没有人生来洒脱,都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
19楼2014-02-28 11:05:03
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小尾巴亚杰

金虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2014-02-28 11:05:03
我也是这样做的,但是不是所有的都很理想,一般还是很难达到200ng/ul
的浓度,可能柱子回收小片段DNA还是有限的吧?之前1000bp左右的目的片段,一次PCR回收浓度都在200-300ng/ul左右的...

估计
20楼2014-02-28 11:14:06
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