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连接效率低，重组质粒无法酶切 已有1人参与
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求助各位，本人最近克隆十分不顺利，T载体自连情况严重，转化后白斑很少，全是蓝色和淡蓝色菌落，挑选五个菌落，三个白色和两个淡蓝色，质粒小提后酶切检测，兰斑倒是能切开，但无法理解白斑无法酶切，T载体为实验室自制，载体上有一个酶切位点。以前实验要么是切不对，就是没插入目的片段，要么是一条带，没有插入片段。但最近经常出现这种无法酶切的情况，不知哪里出了问题，恳请各位大牛帮忙分析分析！小弟不胜感激！ 下图中Marker为Thermo 10kb ladder，条带依次为三个白斑和两个淡蓝斑，Thermo 普通限制酶 ApaI，10ul体系，37度酶切4小时。  1.jpg |
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3楼2014-02-14 16:31:58
lvbobo823
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4楼2014-02-14 21:08:47
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