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sylar731

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1809821
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专业: 作物分子育种

[求助] 连接效率低，重组质粒无法酶切已有1人参与

求助各位，本人最近克隆十分不顺利，T载体自连情况严重，转化后白斑很少，全是蓝色和淡蓝色菌落，挑选五个菌落，三个白色和两个淡蓝色，质粒小提后酶切检测，兰斑倒是能切开，但无法理解白斑无法酶切，T载体为实验室自制，载体上有一个酶切位点。以前实验要么是切不对，就是没插入目的片段，要么是一条带，没有插入片段。但最近经常出现这种无法酶切的情况，不知哪里出了问题，恳请各位大牛帮忙分析分析！小弟不胜感激！
下图中Marker为Thermo 10kb ladder，条带依次为三个白斑和两个淡蓝斑，Thermo 普通限制酶 ApaI，10ul体系，37度酶切4小时。

连接效率低，重组质粒无法酶切

1.jpg

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1楼 2014-02-14 12:00:58

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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

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专业: 植物遗传学

【答案】应助回帖

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sylar731: 金币+5, ★有帮助 2014-02-14 16:33:04
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-14 16:58:41

估计是你们载体出问题。建议你们选测序好的载体，单克隆大提质粒做载体，这样保证载体一致。没必要非用自制的T载体，你选商业化的也便宜。

赞一下(1人)

hehe

2楼2014-02-14 15:30:00

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