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单酶切切不开的原因？
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| 本人设计一对引物进行一段基因的PCR扩增，引物两端分别带有Nco I和BamH I的酶切位点，将PCR产物胶回收后连接在T载体上然后利用两个酶双酶切，但是电泳图谱显示双酶切结果跟单酶切图谱一样，因此将质粒分别利用BamH I和Nco I单酶切，验证是哪个酶的原因，结果显示BamH I切开但Nco I未切开，因此用Nco I酶切另一含有位点的质粒，结果切开了，表明Nco I没有失活，这到底是什么原因？难道公司合成的引物有问题，Nco I位点突变了？ |
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