应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 单酶切切不开的原因？
51/1返回列表
查看: 2715  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 单酶切切不开的原因？

本人设计一对引物进行一段基因的PCR扩增，引物两端分别带有Nco I和BamH I的酶切位点，将PCR产物胶回收后连接在T载体上然后利用两个酶双酶切，但是电泳图谱显示双酶切结果跟单酶切图谱一样，因此将质粒分别利用BamH I和Nco I单酶切，验证是哪个酶的原因，结果显示BamH I切开但Nco I未切开，因此用Nco I酶切另一含有位点的质粒，结果切开了，表明Nco I没有失活，这到底是什么原因？难道公司合成的引物有问题，Nco I位点突变了？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-10 14:18:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+1, ★有帮助 2014-02-11 08:53:25
引用回帖:
4楼: Originally posted by ljj0720 at 2014-02-10 16:50:00
我之前做过类似实验不少，总结，有以下几个可能：
1、引物设计是不是有问题
2、试剂，酶有没有问题
3、操作：比如温度，酶切时间，酶切时加的试剂是否对等问题
4、还有一种可能是基因突变了，酶切位点不存在了

酶切位点GC岛甲基化——也有可能切不开。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-02-10 18:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

machao8405

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-02-11 08:54:48
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-11 15:18:38
你可以测序一下，看看你克隆到的序列里面是不是真的引入了酶切位点，另外，酶切位点有没有加保护碱基，只要操作没问题，试剂没问题，酶切位点确实存在，那就基本不可能切不开
赞一下 回复此楼
2楼2014-02-10 15:23:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+2, ★有帮助 2014-02-11 08:50:35
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-12 13:46:35
你扩片段用高保真酶会出现把酶切位点改变的可能。我们这之前出现这种情况。
赞一下 回复此楼
hehe
3楼2014-02-10 15:26:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-02-11 15:18:44
我之前做过类似实验不少，总结，有以下几个可能：
1、引物设计是不是有问题
2、试剂，酶有没有问题
3、操作：比如温度，酶切时间，酶切时加的试剂是否对等问题
4、还有一种可能是基因突变了，酶切位点不存在了
赞一下 回复此楼
4楼2014-02-10 16:50:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +4 炎黄贵胄 2026-08-22 5/250 2026-08-24 02:09 by 流流伤
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭