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铁虫 (小有名气)

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[求助] 单酶切切不开的原因？

本人设计一对引物进行一段基因的PCR扩增，引物两端分别带有Nco I和BamH I的酶切位点，将PCR产物胶回收后连接在T载体上然后利用两个酶双酶切，但是电泳图谱显示双酶切结果跟单酶切图谱一样，因此将质粒分别利用BamH I和Nco I单酶切，验证是哪个酶的原因，结果显示BamH I切开但Nco I未切开，因此用Nco I酶切另一含有位点的质粒，结果切开了，表明Nco I没有失活，这到底是什么原因？难道公司合成的引物有问题，Nco I位点突变了？

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1楼 2014-02-10 14:18:08

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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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574759350: 金币+1, ★有帮助 2014-02-11 08:53:25

引用回帖:

4楼: Originally posted by ljj0720 at 2014-02-10 16:50:00
我之前做过类似实验不少，总结，有以下几个可能：
1、引物设计是不是有问题
2、试剂，酶有没有问题
3、操作：比如温度，酶切时间，酶切时加的试剂是否对等问题
4、还有一种可能是基因突变了，酶切位点不存在了

酶切位点GC岛甲基化——也有可能切不开。