| 查看: 1581 | 回复: 15 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
连接转化的问题 已有2人参与
|
||
| 做了几次连接转化都不行，没有菌落，培养基上光秃秃的。我连接是5ul体系，4ul回收产物1ulPEASK-T3,25度20min，pcr控温。感受态用的天根的T1。小白求助啊。马上要过年了回收的DNA也快2星期了，一直-20放着，年前不行的话就悲催了。我是想测序，单纯的就是测DNA序列，大概3000bp左右。求大神指导问题出哪或者方法步骤借鉴给小弟一下，谢啦 |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有110人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 目的基因与载体连接问题
已经有8人回复
- 长片段连接问题
已经有14人回复
- 连接转化不长菌是怎么回事？？？
已经有15人回复
- 单酶切的大片段连接转化及多个片段的连接转化问题
已经有8人回复
- 目的基因的连接与转化
已经有3人回复
- 载体和酶切片段连接的问题
已经有5人回复
- 长片段连接问题
已经有12人回复
- 关于连接转化载体和片段的问题
已经有6人回复
- T载体连接问题
已经有3人回复
- 大肠杆菌连接转化假阳性很多
已经有5人回复
- 大片段连接问题
已经有20人回复
- 连接转化出现很多微小的菌落
已经有14人回复
- 连接与转化问题
已经有5人回复
- 连接转化不成功问题
已经有17人回复
- 求助关于转化的问题？
已经有22人回复
- 目的基因连接pGEX-6p-1进行转化的问题
已经有14人回复
- 连接体系的确定
已经有19人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 求助连接反应中的问题，谢谢!
已经有7人回复
- 【求助/交流】目的基因与pPIC9K连接的问题！
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于酶切产物连接的一点问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】关于T载体连接问题
已经有22人回复
- 【求助/交流】长片段的连接转化
已经有9人回复
- 【求助/交流】转化后涂板问题
已经有10人回复
10楼2014-01-12 08:26:13
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-01-08 11:45:55
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-01-08 11:45:55
|
看你用的是T1载体，估计应该是用pEASY载体，这个方法很成熟也比较容易，看看你是否忽略了以下几点： 1，你PCR时用的Taq酶能否在产物的3‘端产生polyA末端； 2，平板抗性（一般是Amp），是否过量。 3，有时候感受态细胞很脆弱，如果出现过反复冻融最好不用了，也就是看一看感受态的质量。 4，最重要的一点，你的转化操作可能出现了问题：因为不论你是否连接成功（就算出现转化后的载体自连），只要转化成功，就会有菌落在抗性板子上生长。 总之，3和4是你要重点考虑的。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
jmh5d2楼2014-01-08 10:17:33
shiliyusly
新虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 265.4
- 散金: 17
- 红花: 1
- 帖子: 138
- 在线: 71.5小时
- 虫号: 1434769
- 注册: 2011-10-10
- 专业: 食品科学基础
3楼2014-01-08 13:38:04
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
4楼2014-01-08 18:18:07
5