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nietiantt

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR引物设计 已有3人参与

准备做荧光定量pcr,从组织中提取总RNA后反转录。
通过在NCBI查找,只能找到mRNA序列,找不到cDNA序列。
看有些提问回答说mRNA序列与cDNA序列相同,但是他们不是互补的吗?

我要设计引物应该以什么为模板。mRNA可以吗?
还是应该以什么为模板。
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-08 19:08:58
引用回帖:
7楼: Originally posted by nietiantt at 2014-01-08 10:59:42
用RNA反转录得到的cDNA不是和mRNA是互补的吗?
根据mrna设计引物还能好使吗?...

以mRNA设计的上游和下游引物对应cDNA就是下游和上游引物,最终PCR产物是以上下游引物为2端的双链DNA,所以我认为设计引物所用的模板是mRNA还是CDNA不重要,个人见解
9楼2014-01-08 13:13:49
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-06 12:37:47
确切的说,你找到的是有义链的序列,对应的就是mRNA序列,设计引物就是拿该序列作为模板的
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-01-06 11:25:06
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loveerobin

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
公司里不是给设计吗
3楼2014-01-06 15:00:19
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-07 10:15:39
genbank上传的序列是mRNA也就是正义链,用mRNA设计引物没有问题的
4楼2014-01-06 19:03:28
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