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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR引物设计
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nietiantt

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR引物设计 已有3人参与

准备做荧光定量pcr，从组织中提取总RNA后反转录。
通过在NCBI查找，只能找到mRNA序列,找不到cDNA序列。
看有些提问回答说mRNA序列与cDNA序列相同，但是他们不是互补的吗？

我要设计引物应该以什么为模板。mRNA可以吗？
还是应该以什么为模板。
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1楼 2014-01-06 09:58:09
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-06 12:37:47
确切的说，你找到的是有义链的序列，对应的就是mRNA序列，设计引物就是拿该序列作为模板的
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2014-01-06 11:25:06
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loveerobin

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
公司里不是给设计吗
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3楼2014-01-06 15:00:19
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shiliyusly

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-07 10:15:39
genbank上传的序列是mRNA也就是正义链，用mRNA设计引物没有问题的
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4楼2014-01-06 19:03:28
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nietiantt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-06 11:25:06
确切的说，你找到的是有义链的序列，对应的就是mRNA序列，设计引物就是拿该序列作为模板的

用RNA反转录得到的cDNA不是和mRNA是互补的吗？
根据mrna设计引物还能好使吗？
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5楼2014-01-08 10:58:24
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nietiantt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by loveerobin at 2014-01-06 15:00:19
公司里不是给设计吗

亲，哪家公司？
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6楼2014-01-08 10:58:54
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nietiantt

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shiliyusly at 2014-01-06 19:03:28
genbank上传的序列是mRNA也就是正义链，用mRNA设计引物没有问题的

用RNA反转录得到的cDNA不是和mRNA是互补的吗？
根据mrna设计引物还能好使吗？
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7楼2014-01-08 10:59:42
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loveerobin

木虫 (职业作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nietiantt at 2014-01-08 10:58:54
亲，哪家公司？...

给你发消息吧
当时我们做的时候，就是你发给他序列，引物免费给你设计
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8楼2014-01-08 11:34:03
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shiliyusly

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-08 19:08:58
引用回帖:
7楼: Originally posted by nietiantt at 2014-01-08 10:59:42
用RNA反转录得到的cDNA不是和mRNA是互补的吗？
根据mrna设计引物还能好使吗？...

以mRNA设计的上游和下游引物对应cDNA就是下游和上游引物，最终PCR产物是以上下游引物为2端的双链DNA，所以我认为设计引物所用的模板是mRNA还是CDNA不重要，个人见解
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9楼2014-01-08 13:13:49
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