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文飞778899

银虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增结果 已有4人参与

亲们，帮我看下这图片，没有条带，只是在加样口有少许亮带，这亮带是什么呢？谢谢～～P了好多次，酶也换了，模板也一直重提，体系也试了好几种，就是这结果，真心难过！
PCR扩增结果
F3.jpg
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1楼 2014-01-03 19:51:11
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文飞778899

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 20083630zhan at 2014-01-03 21:30:51
从你的电泳结果来看，可以得出一下结论：
1：有引物二聚体，说明你应该是没有犯低级错误
2：加样孔有亮的条带，说明可能是较大的DNA 为跑出（一般情况不会），再者就是你提取的基因组或者是质粒含有蛋白质等其他杂 ...

这组引物也是引用别人文献的，退火温度先按文献说明跑了没有，后来我把退火温度降低了还是没有。
同样的模板，我昨晚用其它引物跑了下有带，但对照也有模糊带，今天再跑看看。
嗯，模板确实是粗提液，杂质比较多。
这组引物好多文献都用过，都说是最佳引物，怎么我就跑不出来，dNTP,buffer,用来跑其它的都能扩得出来的呀。
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8楼2014-01-04 12:09:07
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gyl121

新虫 (正式写手)
怎么没有人回答呢？我也是这个问题，这两天做这个实验，DNA别的引物都可以扩增出条带，就这个引物不靠谱，我都累了； 所以，我觉得不是DNA模板的原因，点样孔部分出现特别亮（我的实验）我觉得DNA浓度高了，可是稀释了5,10倍结果没多大变化，所以认为是浓度不合适，希望与楼主交流下意见
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不经一番寒彻骨，怎得梅花扑鼻香？为科学进步不懈努力
2楼2014-01-03 20:00:49
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:25:20
大部分原因可能是模板问题
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3楼2014-01-03 20:28:00
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紫色的刺客

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:25:29
这个明显没结果，建议你先用别人报道过的基因引物做个阳性对照，如果阳性对照都没跑出来，那就是模板有问题，如果阳性对照有结果，就是你这个引物问题，建议做个温度梯度
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4楼2014-01-03 20:54:59
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