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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增结果
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文飞778899

银虫 (小有名气)

[求助] PCR扩增结果已有4人参与

亲们，帮我看下这图片，没有条带，只是在加样口有少许亮带，这亮带是什么呢？谢谢～～P了好多次，酶也换了，模板也一直重提，体系也试了好几种，就是这结果，真心难过！
PCR扩增结果
F3.jpg
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1楼2014-01-03 19:51:11
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lhf903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:25:20
大部分原因可能是模板问题
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3楼2014-01-03 20:28:00
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gyl121

新虫 (正式写手)
怎么没有人回答呢？我也是这个问题，这两天做这个实验，DNA别的引物都可以扩增出条带，就这个引物不靠谱，我都累了； 所以，我觉得不是DNA模板的原因，点样孔部分出现特别亮（我的实验）我觉得DNA浓度高了，可是稀释了5,10倍结果没多大变化，所以认为是浓度不合适，希望与楼主交流下意见
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不经一番寒彻骨，怎得梅花扑鼻香？为科学进步不懈努力
2楼2014-01-03 20:00:49
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紫色的刺客

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:25:29
这个明显没结果，建议你先用别人报道过的基因引物做个阳性对照，如果阳性对照都没跑出来，那就是模板有问题，如果阳性对照有结果，就是你这个引物问题，建议做个温度梯度
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4楼2014-01-03 20:54:59
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-04 00:25:42
文飞778899: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-04 12:00:26
从你的电泳结果来看，可以得出一下结论：
1：有引物二聚体，说明你应该是没有犯低级错误
2：加样孔有亮的条带，说明可能是较大的DNA 为跑出（一般情况不会），再者就是你提取的基因组或者是质粒含有蛋白质等其他杂志
3：泳道有很明显的弥散现象，说明你的模板里面的DNA降解非常严重，建议考虑一下你的模板的质量问题
4：退火温度太高，核对一下你的PCR程序以及Tm值
5：dNTP有问题，可以更换PCR体系中的dNTP以及buffer
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5楼2014-01-03 21:30:51
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