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细菌质粒提取浓度太低求助 已有8人参与
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我质粒提取已经好几次啦，每次提取出来浓度都是很低，我这是低拷贝质粒，想提取出质粒做转化实验，求大侠指导一下并帮我分析一下为什么我提取的质粒跑电泳结果显示浓度太低？ 我曾经加大过菌量可是结果却提不出来，我的操作步骤都是严格按照天根小量中提试剂盒的说明书上来的，求高人指导下奥。 |
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yudaoqian88
至尊木虫 (知名作家)
不良人
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kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-12-24 08:21:05
jsxzzxj: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-12-24 09:25:15
gyesang: 回帖置顶 2014-03-28 16:39:44
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gyesang: 回帖置顶 2014-03-28 16:39:44
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质粒提取数量少，只是质粒拷贝数低，裂解的菌液量少或者不充分，柱子回收效率不高的问题！ 有时候按照正规操作提取质粒，也有提不出来的现象是，可能是质粒丢失了-原因不知！ 楼主可以这样： 1对冻存的原始菌液做抗性划线培养，一来借助抗生素纯化质粒，二来也提高了菌活性液。 2随机挑选几个单克隆扩摇，用报告基因或者启动子序列作为Pcr对象进行检测或者合适酶的酶切检测验证-可以放后面做，一般都对！ 3最大限度地提高菌体活性，先对正确的克隆小管扩摇，然后再抽取新鲜菌液再扩摇！ 4注意培养条件，培养时间不宜过长，一般8-12小时或15小时以内吧！ 5按比例加大样试剂总量，提取过程注意几个细节，比如缓慢混匀，裂解后静止等！ 6用60度左右预热的水洗脱，洗脱两遍，注意水的用量。 7可以加多水洗脱后，利用抽真空法浓缩质粒！ 8有些盒子对质粒大小也有要求，应细看说明书！ [ 发自小木虫客户端 ] |
7楼2013-12-24 04:38:06
zhl875891551
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