应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 关于大肠杆菌表达目标蛋白问题
221/1返回列表
查看: 2297  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sophia-yxh

铜虫 (正式写手)

[交流] 关于大肠杆菌表达目标蛋白问题

最近几批的发酵过程中发现，发酵所得的目标蛋白的260的吸光度接近是280时的3倍，可以判定里面几乎全部是核酸，目标蛋白很少了。

后来我查阅资料发现我们添加的tryptone和酵母粉（OXOID)中氨基酸成分有几种是没有的，而恰巧我们目标蛋白中是需要的。我和领导说了这一情况，但是他说大肠杆菌是可以合成各种氨基酸的，不会影响目标蛋白的合成的。我有点疑惑的是，在翻译的时候，由于比较快速而造成大肠杆菌合成这些氨基酸的速度慢，而导致目标蛋白没有合成成功呢？  他说不会的，我的想法是不是很幼稚啊？  而且他一直说发酵没有问题，是纯化和复性的问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-12-23 11:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-01-14 23:06:21
会不会是你的目标蛋白结合核酸？你可以试试用核酸酶处理样品后再纯化，看结果如何。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-23 11:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fakebook

木虫 (文坛精英)
★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
回复此楼
4楼2013-12-23 12:22:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heibi

金虫 (文坛精英)
★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
深深祝福
回复此楼
5楼2013-12-23 12:22:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niu.bi

木虫 (文坛精英)
★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
Good luck
回复此楼
6楼2013-12-23 12:22:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

b729

金虫 (文坛精英)
★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
愿楼主心想事成
回复此楼
7楼2013-12-23 12:23:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

seeforme

新虫 (知名作家)
★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
Good luck
回复此楼
8楼2013-12-23 12:23:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wendy3

金虫 (文坛精英)
★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
祝福楼主
回复此楼
10楼2013-12-23 12:24:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (正式写手)
★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
本帖仅楼主可见
13楼2013-12-23 14:21:59
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

181587941

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2014-01-14 23:06:30
你领导说的有一定道理，因为高密度发酵时，很多培养基配方都不含酵母粉和蛋白胨的，表达也很好啊。但是不可否认有些时候加入氨基酸可以提高表达量。具体的要做实验证明的，理论毕竟是理论，谁说了都不一定对，数据说明一切。另外，靠260和280不能说明你的表达情况好坏，应该通过电泳、ELISA等手段，数据才比较有说服力。
赞一下 回复此楼
14楼2013-12-23 15:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sophia-yxh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-23 11:54:00
会不会是你的目标蛋白结合核酸？你可以试试用核酸酶处理样品后再纯化，看结果如何。

是复性好后用核酸酶处理吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
15楼2013-12-24 08:26:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sophia-yxh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 181587941 at 2013-12-23 15:52:01
你领导说的有一定道理，因为高密度发酵时，很多培养基配方都不含酵母粉和蛋白胨的，表达也很好啊。但是不可否认有些时候加入氨基酸可以提高表达量。具体的要做实验证明的，理论毕竟是理论，谁说了都不一定对，数据说 ...

电泳条带显示目标蛋白很少，几乎没有，也跑了琼脂糖核酸电泳，也没看到有核酸，奇怪这溶液里面是什么捏？？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
16楼2013-12-24 08:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
15楼: Originally posted by sophia-yxh at 2013-12-24 08:26:25
是复性好后用核酸酶处理吗？
...

任何时候，只要体系大致满足核酸酶的缓冲和离子条件。
赞一下 回复此楼
17楼2013-12-24 08:50:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sophia-yxh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-24 08:50:10
任何时候，只要体系大致满足核酸酶的缓冲和离子条件。...

透析复性好的蛋白要上Q柱进行层析的，若加入核酸酶会不会影响蛋白的柱行为呢？

还有目标的pi是4.8，我们用的缓冲液的pH8.0，但在这个条件下，有的时候还是挂不上柱子，这是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
18楼2013-12-24 09:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
18楼: Originally posted by sophia-yxh at 2013-12-24 09:33:30
透析复性好的蛋白要上Q柱进行层析的，若加入核酸酶会不会影响蛋白的柱行为呢？

还有目标的pi是4.8，我们用的缓冲液的pH8.0，但在这个条件下，有的时候还是挂不上柱子，这是怎么回事呢？...

不会影响上柱。通常有核酸的样品反而不好。
挂不上柱的原因可能是目标蛋白与其它蛋白/核酸作用形成复合物，影响其带电性。所以我觉得你可以试试用核酸酶作用一下，看看能不能纯化到目标蛋白。
赞一下 回复此楼
19楼2013-12-24 12:46:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zeroon

木虫 (正式写手)
★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
愿李啸领导总工能想出对策来
赞一下 回复此楼
20楼2014-01-14 22:00:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kika8014

金虫 (正式写手)
★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
你好，你的问题，可以明确的说，不是你说的原因。浸粉，或胰蛋白胨中有几种氨基酸是没有，说法不科学，因为不可能，浸粉谷氨酸，丙氨酸等相对含量高点，其它成分比较均衡，胰蛋白胨也差不多，你说有几种氨基酸没有的可能性是，测试方法问题。
赞一下 回复此楼
21楼2016-01-12 15:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小花木兰

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
高密度发酵大肠杆菌，培养基都是用到蛋白胨和酵母粉的，有不用到吗
赞一下 回复此楼
22楼2016-01-12 16:26:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
chentao3楼
2013-12-23 12:17   回复  
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
峰锋风逢烽9楼
2013-12-23 12:23   回复  
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
xiejf11楼
2013-12-23 12:27   回复  
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
westlife91112楼
2013-12-23 12:33   回复  
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 sophia-yxh 的主题更新
221/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中南大学物理学，英一66，求调剂 +3 长烟旖旎 2026-04-08 4/200 2026-04-09 21:27 by wutongshun
[考研] 材料复试求调剂 +16 xhhdjdjsjks 2026-04-09 16/800 2026-04-09 20:56 by bljnqdcc
[考研] 301求调剂 +3 XYPLR 2026-04-05 5/250 2026-04-09 20:55 by lbsjt
[考研] 269电子信息求调剂，可转专业 +9 独酌wl 2026-04-06 9/450 2026-04-09 20:55 by laoshidan
[材料工程] 材料调剂推荐 +3 蛋糕x2 2026-04-07 3/150 2026-04-09 17:01 by Lilly_Li
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +5 Ytyt11 2026-04-09 6/300 2026-04-09 14:40 by Ytyt11
[考研] 085404，334分，求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-06 14/700 2026-04-08 23:00 by 猪会飞
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 298求调剂 +4 manman511 2026-04-05 4/200 2026-04-08 16:50 by tjzhao
[考研] 一志愿哈工大，初试329，求环境科学与工程调剂！ +11 余未辛 2026-04-06 11/550 2026-04-08 15:21 by screening
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
[考研] 材料调剂 +13 汉123456 2026-04-07 14/700 2026-04-07 22:53 by 来看流星雨10
[考研] 本科生物信息学，总分362 求07 08调剂 +6 q小倩1210 2026-04-06 6/300 2026-04-07 19:40 by macy2011
[考研] 复试调剂 +14 呼呼？~+123456 2026-04-05 14/700 2026-04-06 22:50 by chenzhimin
[考研] 工科370求调剂 +3 溏心煎鸡蛋 2026-04-05 3/150 2026-04-06 10:55 by 这是一个无聊的�
[考研] 一志愿9材料学硕297已过六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-04-04 12/600 2026-04-05 19:04 by 蓝云思雨
[考研] 326求调剂 +3 顾若浮生 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:32 by 蓝云思雨
[考研] 材料调剂 +7 dxy调剂 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:15 by 陌秋26
[考研] 317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂 +6 YinTai 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:30 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭