应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 关于大肠杆菌表达目标蛋白问题
51/1返回列表
查看: 2351  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sophia-yxh

铜虫 (正式写手)

[交流] 关于大肠杆菌表达目标蛋白问题

最近几批的发酵过程中发现，发酵所得的目标蛋白的260的吸光度接近是280时的3倍，可以判定里面几乎全部是核酸，目标蛋白很少了。

后来我查阅资料发现我们添加的tryptone和酵母粉（OXOID)中氨基酸成分有几种是没有的，而恰巧我们目标蛋白中是需要的。我和领导说了这一情况，但是他说大肠杆菌是可以合成各种氨基酸的，不会影响目标蛋白的合成的。我有点疑惑的是，在翻译的时候，由于比较快速而造成大肠杆菌合成这些氨基酸的速度慢，而导致目标蛋白没有合成成功呢？  他说不会的，我的想法是不是很幼稚啊？  而且他一直说发酵没有问题，是纯化和复性的问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-12-23 11:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sophia-yxh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-24 08:50:10
任何时候，只要体系大致满足核酸酶的缓冲和离子条件。...

透析复性好的蛋白要上Q柱进行层析的，若加入核酸酶会不会影响蛋白的柱行为呢？

还有目标的pi是4.8，我们用的缓冲液的pH8.0，但在这个条件下，有的时候还是挂不上柱子，这是怎么回事呢？
赞一下 回复此楼
18楼2013-12-24 09:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-01-14 23:06:21
会不会是你的目标蛋白结合核酸？你可以试试用核酸酶处理样品后再纯化，看结果如何。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-23 11:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

181587941

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2014-01-14 23:06:30
你领导说的有一定道理，因为高密度发酵时，很多培养基配方都不含酵母粉和蛋白胨的，表达也很好啊。但是不可否认有些时候加入氨基酸可以提高表达量。具体的要做实验证明的，理论毕竟是理论，谁说了都不一定对，数据说明一切。另外，靠260和280不能说明你的表达情况好坏，应该通过电泳、ELISA等手段，数据才比较有说服力。
赞一下 回复此楼
14楼2013-12-23 15:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人！！！ +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考研] 急需调剂 +9 绝不放弃22 2026-04-15 10/500 2026-04-18 08:09 by chixmc
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭