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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)


[交流] 关于大肠杆菌表达目标蛋白问题

最近几批的发酵过程中发现,发酵所得的目标蛋白的260的吸光度接近是280时的3倍,可以判定里面几乎全部是核酸,目标蛋白很少了。

后来我查阅资料发现我们添加的tryptone和酵母粉(OXOID)中氨基酸成分有几种是没有的,而恰巧我们目标蛋白中是需要的。我和领导说了这一情况,但是他说大肠杆菌是可以合成各种氨基酸的,不会影响目标蛋白的合成的。我有点疑惑的是,在翻译的时候,由于比较快速而造成大肠杆菌合成这些氨基酸的速度慢,而导致目标蛋白没有合成成功呢?  他说不会的,我的想法是不是很幼稚啊?  而且他一直说发酵没有问题,是纯化和复性的问题。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


引用回帖:
15楼: Originally posted by sophia-yxh at 2013-12-24 08:26:25
是复性好后用核酸酶处理吗?
...

任何时候,只要体系大致满足核酸酶的缓冲和离子条件。
17楼2013-12-24 08:50:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


★ ★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-01-14 23:06:21
会不会是你的目标蛋白结合核酸?你可以试试用核酸酶处理样品后再纯化,看结果如何。
2楼2013-12-23 11:54:00
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181587941

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+3, good! 2014-01-14 23:06:30
你领导说的有一定道理,因为高密度发酵时,很多培养基配方都不含酵母粉和蛋白胨的,表达也很好啊。但是不可否认有些时候加入氨基酸可以提高表达量。具体的要做实验证明的,理论毕竟是理论,谁说了都不一定对,数据说明一切。另外,靠260和280不能说明你的表达情况好坏,应该通过电泳、ELISA等手段,数据才比较有说服力。
14楼2013-12-23 15:52:01
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