应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 关于大肠杆菌表达目标蛋白问题
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 2315  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

sophia-yxh

铜虫 (正式写手)

[交流] 关于大肠杆菌表达目标蛋白问题

最近几批的发酵过程中发现，发酵所得的目标蛋白的260的吸光度接近是280时的3倍，可以判定里面几乎全部是核酸，目标蛋白很少了。

后来我查阅资料发现我们添加的tryptone和酵母粉（OXOID)中氨基酸成分有几种是没有的，而恰巧我们目标蛋白中是需要的。我和领导说了这一情况，但是他说大肠杆菌是可以合成各种氨基酸的，不会影响目标蛋白的合成的。我有点疑惑的是，在翻译的时候，由于比较快速而造成大肠杆菌合成这些氨基酸的速度慢，而导致目标蛋白没有合成成功呢？  他说不会的，我的想法是不是很幼稚啊？  而且他一直说发酵没有问题，是纯化和复性的问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-12-23 11:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sophia-yxh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 181587941 at 2013-12-23 15:52:01
你领导说的有一定道理，因为高密度发酵时，很多培养基配方都不含酵母粉和蛋白胨的，表达也很好啊。但是不可否认有些时候加入氨基酸可以提高表达量。具体的要做实验证明的，理论毕竟是理论，谁说了都不一定对，数据说 ...

电泳条带显示目标蛋白很少，几乎没有，也跑了琼脂糖核酸电泳，也没看到有核酸，奇怪这溶液里面是什么捏？？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
16楼2013-12-24 08:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-01-14 23:06:21
会不会是你的目标蛋白结合核酸？你可以试试用核酸酶处理样品后再纯化，看结果如何。
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-23 11:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

181587941

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
sophia-yxh(金币+1): 谢谢参与
laozuzunzhe: 金币+3, good！ 2014-01-14 23:06:30
你领导说的有一定道理，因为高密度发酵时，很多培养基配方都不含酵母粉和蛋白胨的，表达也很好啊。但是不可否认有些时候加入氨基酸可以提高表达量。具体的要做实验证明的，理论毕竟是理论，谁说了都不一定对，数据说明一切。另外，靠260和280不能说明你的表达情况好坏，应该通过电泳、ELISA等手段，数据才比较有说服力。
赞一下 回复此楼
14楼2013-12-23 15:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 +4 小聂爱学习 2026-04-14 4/200 2026-04-14 20:54 by fqwang
[考研] 通信工程求调剂！！！ +4 zlb770521 2026-04-14 4/200 2026-04-14 18:19 by lbsjt
[考研] 297，工科调剂? +6 河南农业大学-能 2026-04-14 6/300 2026-04-14 16:04 by Art1977
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 一志愿沪9，326求生物学调剂 +10 刘墨墨 2026-04-13 10/500 2026-04-14 15:16 by zs92450
[考研] 085404 298分求调剂 +11 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 12/600 2026-04-14 08:38 by wfj257
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 310求调剂 +15 666真好 2026-04-11 17/850 2026-04-13 22:27 by pies112
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +26 土豆er? 2026-04-09 29/1450 2026-04-13 15:15 by 独醉梦孤城
[考研] 22408 352分求调剂 +5 努力的夏末 2026-04-09 5/250 2026-04-12 19:17 by wj165256
[考研] 291求调剂 +8 关忆北. 2026-04-11 8/400 2026-04-12 09:32 by 逆水乘风
[考研] 280求调剂 +7 兮兮夜夜 2026-04-09 10/500 2026-04-12 00:33 by 蓝云思雨
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 282，电气工程专业，求调剂，不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 085501机械英二77总分294求调剂，接受跨专业学习 +6 守法公民亓纪 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:55 by wp06
[考研] 311求调剂 +6 surte 2026-04-08 13/650 2026-04-09 14:00 by surte
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭