24小时热门版块排行榜    

查看: 7295  |  回复: 8

c_yl

银虫 (初入文坛)

[求助] Western blot目的条带显影后怎么会这样???看图片 已有4人参与

目的条带显出来不应该是一条吗?我的为什么会是这样?一抗 1:1000,二抗1:1万
内参的结果也不太正常,为什么条带是中空的??
求高手指点!!谢谢!!
Western blot目的条带显影后怎么会这样???看图片
目的条带.jpg


Western blot目的条带显影后怎么会这样???看图片-1
内参.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15879003030

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-21 22:03:31
一抗没有特异性?

内参估计是因为转膜的时候有汽泡
2楼2013-12-21 20:12:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-21 22:03:45
c_yl: 金币+10, 有帮助 2014-01-04 13:28:36
感觉是你没有封闭好,两张片子。一般封闭如果不要抽滤装备至少一个小时。此外,如果使用AP底物,建议不适用PBS改用Tris的buffer。置于条带中间空的是因为你的上样量太多,哪里集中了大量抗原经过WB的级联反应最终使得哪里的螯合于二抗的显色的酶比较多,在短时间内消耗了所有的底物,因此哪里没有荧光造成中间空白。
希望对你有用。
3楼2013-12-21 21:51:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

此外,一抗浓度也同样较高,一般在5000-10000就行!
4楼2013-12-21 21:52:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

c_yl

银虫 (初入文坛)

内容已删除
5楼2013-12-21 21:58:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

c_yl

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by stevenshi021 at 2013-12-21 21:51:45
感觉是你没有封闭好,两张片子。一般封闭如果不要抽滤装备至少一个小时。此外,如果使用AP底物,建议不适用PBS改用Tris的buffer。置于条带中间空的是因为你的上样量太多,哪里集中了大量抗原经过WB的级联反应最终使 ...

我用的封闭液是5%的BSA+20ml TBST,封闭两小时,以前做其他蛋白用脱脂奶粉封闭,BSA和脱脂奶粉哪个好一些呢?
6楼2013-12-21 22:10:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tsyxy421

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-22 01:35:09
第一张图,可以采用多压几张片子,找最好的那张分析。第二章中空是显影的问题,不是转膜的问题。
沉稳扎实,勤奋刻苦。
7楼2013-12-21 23:52:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是加完底物特别亮,过段时间就暗了?原因如3楼,二抗结合的量太大了,底物消耗过快,压片时表达量大的反而出现空心或条带浅。一般降低二抗浓度或增强封闭。一般奶粉的蛋白种类多些相当于多种蛋白混合封闭,BSA的蛋白比较单一且较贵。我一般倾向用奶粉(便宜呀)。
8楼2013-12-23 08:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxueflower

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by c_yl at 2013-12-21 22:10:58
我用的封闭液是5%的BSA+20ml TBST,封闭两小时,以前做其他蛋白用脱脂奶粉封闭,BSA和脱脂奶粉哪个好一些呢?...

一般BSA比脱脂奶粉要好一些,相对的价格也会搞一些
花开花落,云卷云舒
9楼2014-06-13 10:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 c_yl 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程专硕 348分求调剂 +3 冬辞. 2026-03-17 5/250 2026-03-21 18:47 by 学员8dgXkO
[考研] 材料求调剂 +3 @taotao 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:11 by WTUChen
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +6 嘉年新程 2026-03-15 6/300 2026-03-21 17:07 by Dream007008
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +6 梨花珞晚风 2026-03-17 6/300 2026-03-21 03:40 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +13 曦熙兮 2026-03-15 13/650 2026-03-20 19:35 by Dream007008
[考研] 281求调剂(0805) +14 烟汐忆海 2026-03-16 25/1250 2026-03-20 15:47 by yuncha
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂(0854都可以) +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
信息提示
请填处理意见