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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 设计实时定量荧光PCR的引物时引物长度一定要在100-200bp之间吗？
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大雨中的狼

新虫 (初入文坛)

[求助] 设计实时定量荧光PCR的引物时引物长度一定要在100-200bp之间吗？ 已有2人参与

设计实时定量荧光PCR的引物时引物长度一定要在100-200bp之间吗？
之前设计了400+和300的，师姐说太长了，不能用
她说太长的话在很短的变性阶段就不能完全断开了，是这样吗？
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1楼 2013-12-20 19:03:07
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

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不是引物长度，是你PCR到的目的片段的长度。
一半的是在200左右比较好的
定量的退火时间是比较短的
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借你一生好不好
2楼2013-12-21 00:38:52
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石头雪儿

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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目的基因的长度一般是要求在100-200左右，太长的话会影响到扩增效率，一般要求实时荧光PCR优化后的扩增效率在90-110%之类，这是保证你使用定量准确性进行计算的前提
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3楼2013-12-21 16:32:36
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