应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » miRNA提取和引物设计，想做实时定量检测下表达量
121/2返回列表12下一页
查看: 2793  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

园艺学童

铜虫 (小有名气)

[求助] miRNA提取和引物设计，想做实时定量检测下表达量 已有1人参与

最近想做有关miRNA的，不知道大家都是怎么提取的呀，听说用提取RNA的试剂盒也能提取，怎么纯化出来呢？
还有，引物大家都是怎么设计的啊，有软件么?内参怎么选得呢，植物，目前还米有数据库呢。。

[ Last edited by 园艺学童 on 2013-2-27 at 22:23 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-02-27 22:22:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lizimin0322

新虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 应助指数-1, 违规存档, 非应助 2013-03-01 02:38:03
支持下！！为什么不和你的师兄导师好好地商量下~
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-02-28 09:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

快乐的大脚

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
园艺学童: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-01 12:31:12
有很多提取RNA的试剂盒产品，有大量的也有小量的，可以根据需要选购。RTPCR引物设计的话两引物间要包含>200bp的内含子，引物长度约为18~24，TM值在55-65之间，FR引物克隆出来的片段在1000bp以内，引物特异性要求好。 希望对你有帮助~
赞一下 回复此楼
2楼2013-02-28 09:20:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

园艺学童

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lizimin0322 at 2013-02-28 09:55:49
支持下！！为什么不和你的师兄导师好好地商量下~

实验室我是第一个做的，导师也不会。。。
赞一下 回复此楼
4楼2013-02-28 12:27:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

园艺学童

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 快乐的大脚 at 2013-02-28 09:20:18
有很多提取RNA的试剂盒产品，有大量的也有小量的，可以根据需要选购。RTPCR引物设计的话两引物间要包含>200bp的内含子，引物长度约为18~24，TM值在55-65之间，FR引物克隆出来的片段在1000bp以内，引物特异性要求 ...

那就是是用什么软件设计的呢？
赞一下 回复此楼
5楼2013-02-28 12:28:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

damo8912

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接提总RNA就行吧
赞一下 回复此楼
6楼2013-02-28 13:16:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happyboy_34

木虫 (著名写手)

…ing

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢详细的回答 2013-03-01 02:38:49
园艺学童: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-01 12:31:34
植物miRNA提取可用天根的植物miRNA提取试剂盒，可以同时提取总RNA(用于miRNA靶基因的定量分析)和小RNA(用于miRNA的定量分析)。
miRNA的定量通常有两种方法：
(1) 用Invitrongen或者Qiagen的miRNA定量试剂盒，试剂盒中包括一条通用引物，原理是将小RNA加上一段特异序列，其中包括与通用引物互补的一段序列，通过后续自己针对自己研究的miRNA设计的特异引物，这样就有了上下游引物用于miRNA的定量研究了；
(2) 用针对自己研究的miRNA特异设计的探针进行定量。

miRNA的引物也根据两种方法而分别设计、合成各自的引物即可，相关中英文文献都能查阅到。

我知道的就这些了，欢迎其他人补充。
赞一下 回复此楼
真理无处不在，但却非唾手可得。
7楼2013-02-28 14:27:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐的大脚

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 园艺学童 at 2013-02-28 12:28:17
那就是是用什么软件设计的呢？...

不用 软件 知道自己的序列直接设计就可以按照上述要求 就行
赞一下 回复此楼
8楼2013-03-01 07:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

园艺学童

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 快乐的大脚 at 2013-03-01 07:32:23
不用 软件 知道自己的序列直接设计就可以按照上述要求 就行...

能详细讲下吗，我现在也已经知道了miRNA的序列，怎么直接设计？辛苦了！
赞一下 回复此楼
9楼2013-03-01 08:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐的大脚

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 园艺学童 at 2013-03-01 08:26:28
能详细讲下吗，我现在也已经知道了miRNA的序列，怎么直接设计？辛苦了！...

你是通过miRNA沉默目的基因的表达吗 检测目的基因被沉默的程度 那么需要提总RNA  
知道目的基因的序列 在目的基因上找一段长度约为18~24的序列作为一端引物，另一端引物距离前一个引物1000bp以内，两引物之间跨过大于200bp的内含子，两引物TM值在55-65之间，然后把克隆的出的目的片段，跟基因库BLAST,来看引物克隆出来片段的序列特异性，要是特异性不好的话就重新选择序列，特异性不好会把其他的基因克隆出来，实验结果不准确。
赞一下 回复此楼
10楼2013-03-04 08:55:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 园艺学童 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-29 19:27 by cqwQDCxMcL3I
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 15:46 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:58 by etmYJ6d2rquH
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:41 by etmYJ6d2rquH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:30 by etmYJ6d2rquH
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-29 14:24 by etmYJ6d2rquH
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-29 14:13 by etmYJ6d2rquH
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 7/350 2026-09-29 14:07 by etmYJ6d2rquH
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 5/250 2026-09-29 13:50 by etmYJ6d2rquH
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 4/200 2026-09-29 09:49 by JzYBbHIXWSrW
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:42 by ZvyPK8n6Nfki
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ZYXdhzDAy9ZX 2026-09-28 3/150 2026-09-29 06:28 by ZvyPK8n6Nfki
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 tqUTOxClQUMF 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:46 by b8fCuTHqckEt
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 GDBe8tDZqE8z 2026-09-28 3/150 2026-09-28 23:12 by b8fCuTHqckEt
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 4/200 2026-09-28 22:55 by ez6fGg9abYaj
[有机交流] 同一个分子，一条来自文献，一条来自AI——不告诉你答案，你会选哪条？ +3 tianxiaoxian 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:44 by tianxiaoxian
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 6/300 2026-09-28 22:15 by ez6fGg9abYaj
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 CfXuS1rDhLYN 2026-09-28 3/150 2026-09-28 19:08 by 9lS3ad5oOymn
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 IDs3scOF0tjC 2026-09-28 4/200 2026-09-28 18:51 by 9lS3ad5oOymn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭