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园艺学童

铜虫 (小有名气)

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虫号: 1868910
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性别: MM
专业: 生物信息学

[求助] miRNA提取和引物设计，想做实时定量检测下表达量已有1人参与

最近想做有关miRNA的，不知道大家都是怎么提取的呀，听说用提取RNA的试剂盒也能提取，怎么纯化出来呢？
还有，引物大家都是怎么设计的啊，有软件么?内参怎么选得呢，植物，目前还米有数据库呢。。

[ Last edited by 园艺学童 on 2013-2-27 at 22:23 ]

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1楼2013-02-27 22:22:32

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快乐的大脚

铜虫 (初入文坛)

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引用回帖:

9楼: Originally posted by 园艺学童 at 2013-03-01 08:26:28
能详细讲下吗，我现在也已经知道了miRNA的序列，怎么直接设计？辛苦了！...

你是通过miRNA沉默目的基因的表达吗检测目的基因被沉默的程度那么需要提总RNA
知道目的基因的序列在目的基因上找一段长度约为18~24的序列作为一端引物，另一端引物距离前一个引物1000bp以内，两引物之间跨过大于200bp的内含子，两引物TM值在55-65之间，然后把克隆的出的目的片段，跟基因库BLAST,来看引物克隆出来片段的序列特异性，要是特异性不好的话就重新选择序列，特异性不好会把其他的基因克隆出来，实验结果不准确。