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园艺学童铜虫 (小有名气)
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[求助]
miRNA提取和引物设计，想做实时定量检测下表达量 已有1人参与
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最近想做有关miRNA的，不知道大家都是怎么提取的呀，听说用提取RNA的试剂盒也能提取，怎么纯化出来呢？ 还有，引物大家都是怎么设计的啊，有软件么?内参怎么选得呢，植物，目前还米有数据库呢。。 [ Last edited by 园艺学童 on 2013-2-27 at 22:23 ] |
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lizimin0322
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3楼2013-02-28 09:55:49
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植物miRNA提取可用天根的植物miRNA提取试剂盒，可以同时提取总RNA(用于miRNA靶基因的定量分析)和小RNA(用于miRNA的定量分析)。 miRNA的定量通常有两种方法： (1) 用Invitrongen或者Qiagen的miRNA定量试剂盒，试剂盒中包括一条通用引物，原理是将小RNA加上一段特异序列，其中包括与通用引物互补的一段序列，通过后续自己针对自己研究的miRNA设计的特异引物，这样就有了上下游引物用于miRNA的定量研究了； (2) 用针对自己研究的miRNA特异设计的探针进行定量。 miRNA的引物也根据两种方法而分别设计、合成各自的引物即可，相关中英文文献都能查阅到。 我知道的就这些了，欢迎其他人补充。 |
7楼2013-02-28 14:27:19
8楼2013-03-01 07:32:23
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