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园艺学童

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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性别: MM
专业: 生物信息学

[求助] miRNA提取和引物设计，想做实时定量检测下表达量已有1人参与

最近想做有关miRNA的，不知道大家都是怎么提取的呀，听说用提取RNA的试剂盒也能提取，怎么纯化出来呢？
还有，引物大家都是怎么设计的啊，有软件么?内参怎么选得呢，植物，目前还米有数据库呢。。

[ Last edited by 园艺学童 on 2013-2-27 at 22:23 ]

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1楼2013-02-27 22:22:32

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happyboy_34

木虫 (著名写手)

…ing

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专业: 林木遗传育种学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢详细的回答 2013-03-01 02:38:49
园艺学童: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-01 12:31:34

植物miRNA提取可用天根的植物miRNA提取试剂盒，可以同时提取总RNA(用于miRNA靶基因的定量分析)和小RNA(用于miRNA的定量分析)。
miRNA的定量通常有两种方法：
(1) 用Invitrongen或者Qiagen的miRNA定量试剂盒，试剂盒中包括一条通用引物，原理是将小RNA加上一段特异序列，其中包括与通用引物互补的一段序列，通过后续自己针对自己研究的miRNA设计的特异引物，这样就有了上下游引物用于miRNA的定量研究了；
(2) 用针对自己研究的miRNA特异设计的探针进行定量。

miRNA的引物也根据两种方法而分别设计、合成各自的引物即可，相关中英文文献都能查阅到。

我知道的就这些了，欢迎其他人补充。