应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒连接问题
71/1返回列表
查看: 706  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

262734003

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒连接问题

我是新手，，最近在做质粒连接 用的是pGl3p做载体，用fse1+xba1双酶切，做了去磷酸化，然后测其浓度只有200ng/ul，我的目的片段只有40bp，做连接的步骤如下
fragment 10ul
vector 2ul
T4ligase 1.5ul
buffer 1.5ul
16℃ 过夜，做转化，但总是做不出，，，求高手指点，，谢谢大家！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-04 15:06:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流！ 2013-12-04 17:48:21
262734003: 金币+1, ★有帮助 2013-12-05 19:04:21
总体系多少ul
放在冰箱4度过夜吧
或者放在pcr仪器里16度过夜
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-12-04 15:13:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-04 18:21:30
262734003: 金币+2 2013-12-05 19:04:38
载体用太多了，载体用量在50-100ng，连接片段很小，肯定不好连，建议降低温度，小片段用量增加，摩尔比用10:1。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-12-04 15:43:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

262734003

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2013-12-04 15:13:04
总体系多少ul
放在冰箱4度过夜吧
或者放在pcr仪器里16度过夜

15ul体系，我直接就是在PCR里16度过夜 第二天拿出直接做转化，，这样是不是会出现问题？？？
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-04 15:46:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

262734003

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-04 15:43:17
载体用太多了，载体用量在50-100ng，连接片段很小，肯定不好连，建议降低温度，小片段用量增加，摩尔比用10:1。

我的片段浓度很大，，有850ng/ul，，，应该比例是多少？？谢谢
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-04 15:47:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

262734003

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-04 15:43:17
载体用太多了，载体用量在50-100ng，连接片段很小，肯定不好连，建议降低温度，小片段用量增加，摩尔比用10:1。

请问，连接时要看目的基因的浓度嘛  摩尔比10:1 具体换算成体积比应该是多少啊？？谢谢
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-04 18:05:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

262734003

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-04 15:43:17
载体用太多了，载体用量在50-100ng，连接片段很小，肯定不好连，建议降低温度，小片段用量增加，摩尔比用10:1。

还有你说的降低温度具体是指降低哪个温度？？不太明白啊！！
赞一下 回复此楼
7楼2013-12-04 18:07:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 262734003 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:33 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:29 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:25 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 01:03 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-30 00:31 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭