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积云降晚露

新虫 (小有名气)

[求助] 线粒体长片段扩增总是失败,有什么好的建议吗? 已有3人参与

我用的longPCR反应程序试过几种不同的方法,前后也设计了数对引物,均没有好的效果,至今只有一对引物偶能出来疑似目的长度的片段,尝试送测多次都没测出来。。引物做梯度退火没有效果。。期间也换了LA Taq酶,结果扩出来的像marker一样,还是测不出。。请问还有什么办法吗?感激!

[ Last edited by silicare on 2014-2-17 at 11:58 ]
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sandse7en at 2014-02-23 16:56:50
请问有相关文献么...

百度一下就有。我做PCR一直加甜菜碱的。
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SHWU200405015.htm
http://wenku.baidu.com/view/600df1d276eeaeaad1f330f4.html
或许对你有帮助。
6楼2014-02-23 19:21:30
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查看全部 9 个回答

kentgrey

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-02-03 02:57:26
可以试试将这个长片段分成两部分克啊
前提是在NCBI上找得到中间片段相似部分,再根据保守序列多设计几对引物
按线粒体的自身性质,母系遗传来找参考基因设计引物
2楼2014-02-02 23:06:10
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积云降晚露

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kentgrey at 2014-02-02 23:06:10
可以试试将这个长片段分成两部分克啊
前提是在NCBI上找得到中间片段相似部分,再根据保守序列多设计几对引物
按线粒体的自身性质,母系遗传来找参考基因设计引物

谢谢您的建议~不过我缺的那段包含控制区,变异大,已经找不到中间可以设计引物的地方了。。唉。。。
3楼2014-02-16 17:48:01
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以试试体系中加点甜菜碱。据说甜菜碱对扩增长片段有帮助的,。
4楼2014-02-17 11:18:17
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