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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 线粒体长片段扩增总是失败，有什么好的建议吗？
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积云降晚露

新虫 (小有名气)

[求助] 线粒体长片段扩增总是失败，有什么好的建议吗？ 已有3人参与

我用的longPCR反应程序试过几种不同的方法，前后也设计了数对引物，均没有好的效果，至今只有一对引物偶能出来疑似目的长度的片段，尝试送测多次都没测出来。。引物做梯度退火没有效果。。期间也换了LA Taq酶，结果扩出来的像marker一样，还是测不出。。请问还有什么办法吗？感激！

[ Last edited by silicare on 2014-2-17 at 11:58 ]
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1楼 2013-12-03 14:14:45
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kentgrey

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-02-03 02:57:26
可以试试将这个长片段分成两部分克啊
前提是在NCBI上找得到中间片段相似部分，再根据保守序列多设计几对引物
按线粒体的自身性质，母系遗传来找参考基因设计引物
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2楼2014-02-02 23:06:10
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积云降晚露

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kentgrey at 2014-02-02 23:06:10
可以试试将这个长片段分成两部分克啊
前提是在NCBI上找得到中间片段相似部分，再根据保守序列多设计几对引物
按线粒体的自身性质，母系遗传来找参考基因设计引物

谢谢您的建议~不过我缺的那段包含控制区，变异大，已经找不到中间可以设计引物的地方了。。唉。。。
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3楼2014-02-16 17:48:01
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以试试体系中加点甜菜碱。据说甜菜碱对扩增长片段有帮助的，。
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4楼2014-02-17 11:18:17
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sandse7en

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-17 11:18:17
可以试试体系中加点甜菜碱。据说甜菜碱对扩增长片段有帮助的，。

请问有相关文献么
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落花无言
5楼2014-02-23 16:56:50
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sandse7en at 2014-02-23 16:56:50
请问有相关文献么...

百度一下就有。我做PCR一直加甜菜碱的。
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SHWU200405015.htm
http://wenku.baidu.com/view/600df1d276eeaeaad1f330f4.html
或许对你有帮助。
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6楼2014-02-23 19:21:30
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sandse7en at 2014-02-23 16:56:50
请问有相关文献么...

百度一下就有。我做PCR一直加甜菜碱的。
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SHWU200405015.htm
http://wenku.baidu.com/view/600df1d276eeaeaad1f330f4.html
或许对你有帮助。
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7楼2014-02-23 19:21:37
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滚爬弹闪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这个甜菜碱可以用于扩线粒体基因吗？
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8楼2014-03-13 08:44:01
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滚爬弹闪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不是说可以用前一段序列的上游引物加下一段序列的下游引物来做long PCR吗？ 我还没做到那一步，你可以试试
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9楼2014-03-13 08:46:34
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