24小时热门版块排行榜    

查看: 1889  |  回复: 8

积云降晚露

新虫 (小有名气)

[求助] 线粒体长片段扩增总是失败,有什么好的建议吗? 已有3人参与

我用的longPCR反应程序试过几种不同的方法,前后也设计了数对引物,均没有好的效果,至今只有一对引物偶能出来疑似目的长度的片段,尝试送测多次都没测出来。。引物做梯度退火没有效果。。期间也换了LA Taq酶,结果扩出来的像marker一样,还是测不出。。请问还有什么办法吗?感激!

[ Last edited by silicare on 2014-2-17 at 11:58 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kentgrey

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-02-03 02:57:26
可以试试将这个长片段分成两部分克啊
前提是在NCBI上找得到中间片段相似部分,再根据保守序列多设计几对引物
按线粒体的自身性质,母系遗传来找参考基因设计引物
2楼2014-02-02 23:06:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

积云降晚露

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kentgrey at 2014-02-02 23:06:10
可以试试将这个长片段分成两部分克啊
前提是在NCBI上找得到中间片段相似部分,再根据保守序列多设计几对引物
按线粒体的自身性质,母系遗传来找参考基因设计引物

谢谢您的建议~不过我缺的那段包含控制区,变异大,已经找不到中间可以设计引物的地方了。。唉。。。
3楼2014-02-16 17:48:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以试试体系中加点甜菜碱。据说甜菜碱对扩增长片段有帮助的,。
4楼2014-02-17 11:18:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sandse7en

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-02-17 11:18:17
可以试试体系中加点甜菜碱。据说甜菜碱对扩增长片段有帮助的,。

请问有相关文献么
落花无言
5楼2014-02-23 16:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sandse7en at 2014-02-23 16:56:50
请问有相关文献么...

百度一下就有。我做PCR一直加甜菜碱的。
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SHWU200405015.htm
http://wenku.baidu.com/view/600df1d276eeaeaad1f330f4.html
或许对你有帮助。
6楼2014-02-23 19:21:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by sandse7en at 2014-02-23 16:56:50
请问有相关文献么...

百度一下就有。我做PCR一直加甜菜碱的。
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SHWU200405015.htm
http://wenku.baidu.com/view/600df1d276eeaeaad1f330f4.html
或许对你有帮助。
7楼2014-02-23 19:21:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

滚爬弹闪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这个甜菜碱可以用于扩线粒体基因吗?
8楼2014-03-13 08:44:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

滚爬弹闪

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

不是说可以用前一段序列的上游引物加下一段序列的下游引物来做long PCR吗? 我还没做到那一步,你可以试试
9楼2014-03-13 08:46:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 积云降晚露 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +5 生物工程调剂 2026-03-17 9/450 2026-03-21 23:32 by zhujy1982
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 化学调剂 +5 yzysaa 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:12 by peike
[考研] 求调剂 +5 十三加油 2026-03-21 5/250 2026-03-21 18:48 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 材料工程(专)一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 0856调剂,是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨; 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
信息提示
请填处理意见