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PCR优化问题 求助
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这是我做148bp 的IL-2 梯度PCR图，首先我设计的引物具体信息是 S: 5' TGGCTGTATTTCGGTAGCAATG 3' A: 5' TGGTGTGTAGAGCTCGAGATGAA 3' GT%,TM 值如图 体系为95度3min； 94度30s，退火梯度30s，72度30s 35个循环，72度5min 梯度pcr温度从左到右分别为 64, 63.3 ,59.6 ,56.7 .54.4，52.8 结果很奇怪，自己片段一个都没有出，出的片段比目的基因大，而且还有很多二聚体，求高人指点，问题出在哪呢？根据结果分析 引物，cDNA，pcr体系和退火温度的设定哪个设的不对么？请大家多给点意见，谢谢 还有哦，大家可以看下我的内参基因就跑出来了如图3，还挺亮的，不知道是不是能排除cDNA的问题呢？  图片2.png  IMG_1650.JPG  IMG_1651.JPG  图3 右边的pcr条带是B-actin内参.JPG [ Last edited by 小星丹925 on 2013-12-5 at 10:19 ] |
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