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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 载体双酶切回收目的条带
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

[求助] 载体双酶切回收目的条带 已有3人参与

用两种酶双酶切pCI-neo载体且回收酶切完全的条带，理论上应切下22bp，酶切后跑电泳，电泳图上显示有两条条带，如图1，哪一条是酶切完全、我应该回收的条带啊？请高手指教，急！！！(DM:5000,图2是没有进行双酶切的载体）
载体双酶切回收目的条带
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载体双酶切回收目的条带-1
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
1楼 2013-12-03 11:52:18
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-12-03 14:47:45
但是酶切前后载体大小差别特别小...

点样的时候，marker、未酶切的载体、酶切后的一起点样。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
4楼2013-12-04 08:18:58
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普通回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-12-03 12:24:09
可以根据你的载体大小来判断。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-03 12:15:16
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-03 12:15:16
可以根据你的载体大小来判断。

但是酶切前后载体大小差别特别小
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
3楼2013-12-03 14:47:45
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drs1998

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-29 16:29:08
从电泳图上看，没有完全酶切的可能性比较大，建议楼主重新酶切，否则连接转化后假阳性结果太多，会严重影响你的实验结果；如果双酶切总是出现这样的情况，建议两种酶分步进行
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5楼2013-12-20 20:48:46
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by drs1998 at 2013-12-20 20:48:46
从电泳图上看，没有完全酶切的可能性比较大，建议楼主重新酶切，否则连接转化后假阳性结果太多，会严重影响你的实验结果；如果双酶切总是出现这样的情况，建议两种酶分步进行

您说的我都有做，但结果都差不多，您觉得延长双酶切时间怎么样，延长至20h？
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
6楼2013-12-25 22:11:19
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weishengsu5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

22bp，直接上柱子回收就行，干嘛切胶

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2013-12-25 22:14:53
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by weishengsu5 at 2013-12-25 22:14:53
22bp，直接上柱子回收就行，干嘛切胶

我要的是除去22bp之后的，实验条件限制呗-只能切胶
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
8楼2013-12-26 10:23:00
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-12-26 10:23:00
我要的是除去22bp之后的，实验条件限制呗-只能切胶...

酶切产物直接用回收试剂盒回收就可以了，22bp的条带吸附柱子的能力小，是回收不回来的，
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9楼2013-12-26 12:59:47
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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以把切好的两个条带分别回收了吧，分别连看看。关键是你的条带太小了吧，才22bp？
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坚持不懈,终会成功!
10楼2013-12-26 13:39:13
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