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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

[求助] 载体双酶切回收目的条带 已有3人参与

用两种酶双酶切pCI-neo载体且回收酶切完全的条带,理论上应切下22bp,酶切后跑电泳,电泳图上显示有两条条带,如图1,哪一条是酶切完全、我应该回收的条带啊?请高手指教,急!!!(DM:5000,图2是没有进行双酶切的载体)
载体双酶切回收目的条带
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载体双酶切回收目的条带-1
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深呼吸,嘴角上扬,告诉自己:我很好!!!
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-12-03 14:47:45
但是酶切前后载体大小差别特别小...

点样的时候,marker、未酶切的载体、酶切后的一起点样。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
4楼2013-12-04 08:18:58
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普通回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-03 12:24:09
可以根据你的载体大小来判断。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-03 12:15:16
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-03 12:15:16
可以根据你的载体大小来判断。

但是酶切前后载体大小差别特别小
深呼吸,嘴角上扬,告诉自己:我很好!!!
3楼2013-12-03 14:47:45
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drs1998

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-29 16:29:08
从电泳图上看,没有完全酶切的可能性比较大,建议楼主重新酶切,否则连接转化后假阳性结果太多,会严重影响你的实验结果;如果双酶切总是出现这样的情况,建议两种酶分步进行
5楼2013-12-20 20:48:46
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by drs1998 at 2013-12-20 20:48:46
从电泳图上看,没有完全酶切的可能性比较大,建议楼主重新酶切,否则连接转化后假阳性结果太多,会严重影响你的实验结果;如果双酶切总是出现这样的情况,建议两种酶分步进行

您说的我都有做,但结果都差不多,您觉得延长双酶切时间怎么样,延长至20h?
深呼吸,嘴角上扬,告诉自己:我很好!!!
6楼2013-12-25 22:11:19
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weishengsu5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

22bp,直接上柱子回收就行,干嘛切胶

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2013-12-25 22:14:53
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by weishengsu5 at 2013-12-25 22:14:53
22bp,直接上柱子回收就行,干嘛切胶

我要的是除去22bp之后的,实验条件限制呗-只能切胶
深呼吸,嘴角上扬,告诉自己:我很好!!!
8楼2013-12-26 10:23:00
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weishengsu5

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by tiankong很蓝 at 2013-12-26 10:23:00
我要的是除去22bp之后的,实验条件限制呗-只能切胶...

酶切产物直接用回收试剂盒回收就可以了,22bp的条带吸附柱子的能力小,是回收不回来的,
9楼2013-12-26 12:59:47
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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以把切好的两个条带分别回收了吧,分别连看看。关键是你的条带太小了吧,才22bp?
坚持不懈,终会成功!
10楼2013-12-26 13:39:13
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