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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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虫号: 2028353
注册: 2012-09-25
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 诱导蛋白表达 SDS-PAGE没有目的条带已有1人参与

我最近在做基因的原核表达，做的是一种内切木聚糖酶，表达载体为pET28a，宿主细胞为BL21。将菌液摇至OD=0.5-0.7时加0.2mM IPTG诱导 20度 180rpm培养12h、16h、20h、24h。菌体超声波破碎，破碎后离心有很多白色沉淀，上清可以测出酶活。将上清液和沉淀进行SDS-PAGE电泳，上清中没有目的条带，沉淀中有目的条带。沉淀中有目的条带应该是包涵体，但是为什么上清中可以测到酶活却没有目的条带啊？急求各路高手指点！！！

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严以律已，宽以待人

1楼2013-12-02 21:13:56

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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

应助: 56 (初中生)
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金币: 10554.2
散金: 288
红花: 12
帖子: 820
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注册: 2010-04-18
性别: GG
专业: 植物遗传学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, 鼓励应助 2013-12-03 09:31:22

1.楼上说的有道理，上清有目的条带，只是和其它条带混在一起不那么明显，
2.再者你看看大肠杆菌里是否含有类似的酶，要有阴性对照，即未表达菌株无酶活

星陈代谢

3楼2013-12-03 08:23:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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