24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 14731  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dirkyoung

金虫 (正式写手)

[求助] western的转膜液配方

最近做大蛋白western遇到一点点问题,于是在网上发现了两种转膜液配方。
配方一:Tris 5.8g,甘氨酸 2.9g,SDS 0.376g
配方二:Tris 3.05g,甘氨酸 14.4g
甲醇都是200ml,然后1L定容。
方案二是我们实验室一直在用的,当然会加极少量的SDS,对于100kd一下的蛋白没有问题,200kd以下的勉强能行,200kd以上的之前没人做过,我做了不行。那么这两个配方里甘氨酸为什么差别会这么大呢?或者说这两种方案各有什么适用范围?
另外我还看到说调整甲醇和SDS的含量对于大蛋白的电转有帮助,不知是否如此。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dirkyoung: 金币+30, 有帮助 2013-11-28 14:08:51
tris和甘氨酸形成缓冲体系,维系体系的pH。我一直用的是配方一。SDS可以增加蛋白的负电性,调高疏水性蛋白的转膜效果。
4楼2013-11-27 12:40:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

zhaoxr0311

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
转膜液不加SDS吧,如果蛋白大的话,可以采用湿转啊,效果好些!
2楼2013-11-27 10:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dirkyoung

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaoxr0311 at 2013-11-27 10:41:39
转膜液不加SDS吧,如果蛋白大的话,可以采用湿转啊,效果好些!

我只有做湿转的条件。我主要问的是这两配方有什么区别,甘氨酸有什么作用。是不是一个湿转,一个半干转的?
3楼2013-11-27 10:46:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

施子墨

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dirkyoung: 金币+20 2013-11-28 14:08:54
我用的是配方一~
没问题的
5楼2013-11-27 15:05:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305求调剂 +4 玛卡巴卡boom 2026-04-11 4/200 2026-04-11 14:28 by 王wn
[考研] 272分材料子求调剂 +34 Loy0361 2026-04-10 43/2150 2026-04-11 13:11 by nixunhuan
[考研] 材料考研调剂 +17 云木达达 2026-04-11 19/950 2026-04-11 12:43 by sxx1988
[考研] 求调剂,262机械专硕 +7 嗯yyl 2026-04-08 7/350 2026-04-11 12:40 by zhq0425
[考研] 086000调剂 +5 十七sa 2026-04-07 5/250 2026-04-11 10:38 by 紫曦紫棋
[考研] 电气专硕320求调剂 +4 小麻子111 2026-04-10 4/200 2026-04-11 10:16 by Delta2012
[考研] 复试调剂 +9 积极向上; 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:25 by 猪会飞
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +5 0856?调剂 2026-04-10 5/250 2026-04-10 20:45 by yukihao
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 环境专硕调剂 +16 会说话的肘子 2026-04-06 16/800 2026-04-10 10:30 by asy1wn
[考研] 材料299专硕求调剂 +10 +21 2026-04-09 10/500 2026-04-09 17:34 by 1753564080
[考研] 材料307分求大佬组收留 +17 Hll胡 2026-04-07 17/850 2026-04-09 10:53 by liuhuiying09
[考研] 求调剂 +13 柒luck 2026-04-07 13/650 2026-04-08 22:46 by 猪会飞
[考研] 材料考研求调剂总分280 +30 mkjlz1 2026-04-06 35/1750 2026-04-08 21:25 by cyh—315
[考研] 307求调剂 +14 超级伊昂大王 2026-04-06 14/700 2026-04-08 07:03 by 无际的草原
[考研] 计算机408|在校多次国家级竞赛获奖|申请调剂 +4 东山大白鹅 2026-04-05 4/200 2026-04-08 00:18 by chongya
[考研] 信工所11408 340分 本科西安交大自动化 +3 moontrek 2026-04-06 3/150 2026-04-07 09:56 by chongya
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +11 大火山小火山 2026-04-05 11/550 2026-04-06 22:55 by yunlongyang
[考研] 生物与医药求调剂 +7 heguanhua 2026-04-05 8/400 2026-04-06 18:41 by macy2011
[考研] 求调剂到材料 +5 程9915 2026-04-06 5/250 2026-04-06 15:21 by yulian1987
信息提示
请填处理意见