24小时热门版块排行榜    

查看: 14666  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dirkyoung

金虫 (正式写手)

[求助] western的转膜液配方

最近做大蛋白western遇到一点点问题,于是在网上发现了两种转膜液配方。
配方一:Tris 5.8g,甘氨酸 2.9g,SDS 0.376g
配方二:Tris 3.05g,甘氨酸 14.4g
甲醇都是200ml,然后1L定容。
方案二是我们实验室一直在用的,当然会加极少量的SDS,对于100kd一下的蛋白没有问题,200kd以下的勉强能行,200kd以上的之前没人做过,我做了不行。那么这两个配方里甘氨酸为什么差别会这么大呢?或者说这两种方案各有什么适用范围?
另外我还看到说调整甲醇和SDS的含量对于大蛋白的电转有帮助,不知是否如此。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dirkyoung: 金币+30, 有帮助 2013-11-28 14:08:51
tris和甘氨酸形成缓冲体系,维系体系的pH。我一直用的是配方一。SDS可以增加蛋白的负电性,调高疏水性蛋白的转膜效果。
4楼2013-11-27 12:40:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

zhaoxr0311

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
转膜液不加SDS吧,如果蛋白大的话,可以采用湿转啊,效果好些!
2楼2013-11-27 10:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dirkyoung

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaoxr0311 at 2013-11-27 10:41:39
转膜液不加SDS吧,如果蛋白大的话,可以采用湿转啊,效果好些!

我只有做湿转的条件。我主要问的是这两配方有什么区别,甘氨酸有什么作用。是不是一个湿转,一个半干转的?
3楼2013-11-27 10:46:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

施子墨

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dirkyoung: 金币+20 2013-11-28 14:08:54
我用的是配方一~
没问题的
5楼2013-11-27 15:05:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +4 Soliloquy_Q 2026-02-28 5/250 2026-02-28 22:49 by 布什戈们
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 材料学调剂 +5 提神豆沙包 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:34 by gaoxiaoniuma
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料类求调剂 +6 wana_kiko 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:20 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 284求调剂 +4 天下熯 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:13 by gaoxiaoniuma
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 5/250 2026-02-28 20:11 by iwuli
[考博] 博士推荐 +5 花儿笑? 2026-02-21 6/300 2026-02-28 18:53 by nxgogo
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[教师之家] 版面费该交吗 +15 苹果在哪里 2026-02-22 18/900 2026-02-28 18:20 by mibaomingg
[考研] 285求调剂 +5 满头大汗的学生 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:10 by 材料专硕调剂;
[考研] 材料调剂 +3 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 3/150 2026-02-28 18:06 by houyaoxu
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
信息提示
请填处理意见