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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western的转膜液配方
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dirkyoung

金虫 (正式写手)

[求助] western的转膜液配方

最近做大蛋白western遇到一点点问题，于是在网上发现了两种转膜液配方。
配方一：Tris 5.8g，甘氨酸 2.9g，SDS 0.376g
配方二：Tris 3.05g，甘氨酸 14.4g
甲醇都是200ml，然后1L定容。
方案二是我们实验室一直在用的，当然会加极少量的SDS，对于100kd一下的蛋白没有问题，200kd以下的勉强能行，200kd以上的之前没人做过，我做了不行。那么这两个配方里甘氨酸为什么差别会这么大呢？或者说这两种方案各有什么适用范围？
另外我还看到说调整甲醇和SDS的含量对于大蛋白的电转有帮助，不知是否如此。
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1楼 2013-11-27 10:12:11
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zhaoxr0311

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转膜液不加SDS吧，如果蛋白大的话，可以采用湿转啊，效果好些！
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2楼2013-11-27 10:41:39
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dirkyoung

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaoxr0311 at 2013-11-27 10:41:39
转膜液不加SDS吧，如果蛋白大的话，可以采用湿转啊，效果好些！

我只有做湿转的条件。我主要问的是这两配方有什么区别，甘氨酸有什么作用。是不是一个湿转，一个半干转的？
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3楼2013-11-27 10:46:03
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dirkyoung: 金币+30, ★有帮助 2013-11-28 14:08:51
tris和甘氨酸形成缓冲体系，维系体系的pH。我一直用的是配方一。SDS可以增加蛋白的负电性，调高疏水性蛋白的转膜效果。
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4楼2013-11-27 12:40:24
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施子墨

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dirkyoung: 金币+20 2013-11-28 14:08:54
我用的是配方一~
没问题的
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5楼2013-11-27 15:05:49
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yuweiguo138

铁虫 (初入文坛)
我用的是配方2，和milipro给的是一样的，甲醇的浓度20%和10%，不加都试过没太大影响，可能我做过的蛋白都很少有小于30KD的吧。SDS我没加过，我用这个配方做285KD MTOR都试没问题的 。
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6楼2014-03-07 17:34:22
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dirkyoung

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuweiguo138 at 2014-03-07 17:34:22
我用的是配方2，和milipro给的是一样的，甲醇的浓度20%和10%，不加都试过没太大影响，可能我做过的蛋白都很少有小于30KD的吧。SDS我没加过，我用这个配方做285KD MTOR都试没问题的 。

麻烦问一下你一般转多久，电压或者电流大概多少。我现在一般250mA恒流3小时，没什么太大问题。不知你的条件什么样子。
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7楼2014-03-08 11:03:43
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