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herjasmine

新虫 (初入文坛)

[求助] 转膜缓冲液的作用?

可以说的具体一点吗?越详细越好。谢谢各位啦!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖应助! 2013-08-02 22:27:34
gyesang: 回帖置顶 2013-08-02 22:27:53
herjasmine: 金币+5, ★★★很有帮助, 很好,谢谢! 2013-08-02 22:37:21
给电场提供介质,与电泳的原理差不多,让蛋白或者核酸在电场力的作用下从负极向正极泳动。转膜缓冲液有多种配方,我不知道你特指哪种。如果是指做western的Tris-甘氨酸系统,tris-glycine用于维持一定pH的缓冲液,甲醇维持一定疏水性,并在一定程度上限制分子扩散。有些配方里面有SDS,主要是可以给蛋白增加负电性,提高蛋白在电场下的泳动速度。
2楼2013-08-02 22:24:40
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普通回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助! 2013-08-02 22:27:45
试剂
1.1 PBS缓冲液:137millimolar/L NaCl,2.7millimolar/L KCl,10millimolar/L Na2HPO4,2millimolar/L KH2PO4,pH为7.5。
1.2   1×转移Buffer(4℃保存)
   甘氨酸                  14.4g
   Tris-base                 3.03g
   甲醇                    200ml
   加水定容至1000ml。
1.3  10×TBS:
   NaCl                    45g
   Tris-base                 60.6g
   水                      加到300ml
   用浓HCl调pH至7.5,定容至500ml。
1.4 封闭液
   1.5g脱脂奶粉加到30ml 1×TBS中。
1.5  T·TBS:
   1000ml 1×TBS加入2ml Tween-20混匀。
1.6 抗体稀释液:
   10 ml T·TBS加入0.5g脱脂奶粉。
1.7  DAB显色液(10ml):
   DAB                6mg
   Tris(0.01M, pH7.6)  9ml
   NiCl2(0.3%,w/v)     1ml
  30% H2O2            10μl
互助互励,共奋共进!!
3楼2013-08-02 22:26:09
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herjasmine

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-02 22:26:09
试剂
1.1 PBS缓冲液:137millimolar/L NaCl,2.7millimolar/L KCl,10millimolar/L Na2HPO4,2millimolar/L KH2PO4,pH为7.5。
1.2   1×转移Buffer(4℃保存)
   甘氨酸                  14.4g
   Tri ...

朋友,我问的是作用,不是配方哦。还是谢谢你!
4楼2013-08-02 22:38:17
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Sthunder

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by herjasmine at 2013-08-02 22:38:17
朋友,我问的是作用,不是配方哦。还是谢谢你!...

从成分可以看出,其作用跟跑胶buffer一样,形成一个到点体系而已,其中甲醇是用来活化膜的。
互助互励,共奋共进!!
5楼2013-08-02 23:34:46
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